MCF-7-GFP?細胞
規(guī)格:70%密度的25cm2培養(yǎng)瓶的細胞一瓶
特點:細胞代數(shù)為4代以內(nèi)
包裝:內(nèi)層無菌自封袋;專用防壓泡沫盒;外層防壓保溫氣泡袋;說明書
細胞來源:ATCC、sciencell、ICLC
貨期:2-3周
運輸方式:快遞運輸
售后:收到細胞后7天,如發(fā)現(xiàn)細胞有質(zhì)量問題(如污染,死亡,快遞運輸?shù)仍颍r,應出具書面質(zhì)量問題報告并及時聯(lián)系銷售人員,我們將盡快為您解決MCF-7-GFP?細胞
1,簽收細胞后狀態(tài)穩(wěn)定可以先凍存留種
2,傳代當天用普通培養(yǎng)基,不要加嘌呤霉素,待細胞培養(yǎng)1-2天,密度達到40%后再加
3,階梯式加藥:待到細胞密度40%以上后,初次加1ug/ml維持觀察2天左右,細胞狀態(tài)無影響再加到1.5-2ug/ml,觀察2天無影響后,最后加到3ug/ml
4,復蘇后,待細胞狀態(tài)穩(wěn)定,密度40%以后,直接加3ug/ml,梯度加藥主要是針對第一次使用嘌呤霉素的時候,以免不同實驗室的藥物濃度和活性差異較大,第一次直接使用高濃度把細胞狀態(tài)弄受損
5,凍存后復蘇初期,可以用15%血清,讓狀態(tài)盡快穩(wěn)定,然后再降為10%
GFP 和 RFP 分別轉(zhuǎn)染的綠色熒光蛋白和紅色熒光蛋白 直接在熒光顯微鏡下 即可觀察
LUC是螢火蟲熒光素酶 需要加底物(D-熒光素鈉鹽)發(fā)光 激發(fā)和發(fā)射波長分別為328nm和533nm
凍存操作步驟(緩凍):
凍存液成分:10%DMSO + 30%血清+基礎培養(yǎng)液
1、取對數(shù)生長期細胞,經(jīng)胰酶消化后,加入適量凍存液, 用吸管吹打制成細胞懸液(1×106 ~ 5 ×106細胞/ml)
2、加入1ml細胞于凍存管中,冷凍管置于4℃ 15 分鐘→ -20℃ 30-60 分鐘→ -80℃ 16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽長期儲存
復蘇操作步驟:
實驗前準備:
1.將水浴鍋預熱至37℃
2.用75%酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺臺面。
3.在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養(yǎng)瓶等