黃曲霉毒素總量（B1、B2、G1、G2、M1、M2）免疫親和柱

【概要】

黃曲霉毒素(AFT)是一類化學(xué)結(jié)構(gòu)類似的化合物，均為二氫呋喃香豆素的衍生物。黃曲霉毒素是主要由黃曲霉 (aspergillus flavus)寄生曲霉 (a.parasiticus)產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物，在濕熱地區(qū)食品和飼料中出現(xiàn)黃曲霉毒素的機率最高。黃曲霉毒素被世界衛(wèi)生組織(WHO)的癌癥研究機構(gòu)劃定為1類致癌物，是一種毒性*的劇毒物質(zhì).黃曲霉毒素的危害性在于對人及動物肝臟組織有破壞作用，嚴(yán)重時可導(dǎo)致肝癌甚至死亡。在天然污染的食品中以黃曲霉毒素B1最為多見，其毒性和致癌性也*。B1是最危險的致癌物，經(jīng)常在玉米，花生，棉花種子，一些干果中常能檢測到。它們在紫外線照射下能產(chǎn)生熒光，根據(jù)熒光顏色不同，將其分為B族和G族兩大類及其衍生物。AFT已發(fā)現(xiàn)20余種。AFT主要污染糧油食品、動植物食品等；如花生、玉米，大米、小麥、豆類、堅果類、肉類、乳及乳制品、水產(chǎn)品等均有黃曲霉毒素污染。世界各國對食品，飼料中的黃曲霉毒素都有嚴(yán)格的*。

【適用范圍及性能】

本公司真菌毒素免疫柱系列產(chǎn)品測試形式是一個高性能的免疫親和柱，設(shè)計用于在進行 HPLC(高效液相色譜法)、GC-MS(氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián) 用 儀)、ELISA(酶聯(lián)免疫吸附劑測定)之前清理(凈化)或 濃縮樣本。

用于定性、定量檢測谷物、副食品、酒類等食品和飼料等樣本中的黃曲霉毒素總量(B1,B2,G1,G2)時的樣品前處理。

柱容量：≥200ng

回收率：≥85%

【試驗原理】

本產(chǎn)品的測定的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng)，黃曲霉毒素單克隆抗體連接在柱內(nèi)凝膠上，樣品中的黃曲霉毒素經(jīng)過提取、過濾、稀釋，然后將樣品提取液緩慢的通過黃曲霉毒素免疫親和層析柱，在免疫親和柱內(nèi)，毒素與抗體結(jié)合，之后洗滌免疫親和柱除去沒有被結(jié)合的其他物質(zhì)。用甲醇洗脫黃曲霉毒素，然后注入到分析儀器中用于檢測。

【包裝組成】

黃曲霉毒素總量標(biāo)準(zhǔn)品(選配)

25支/盒，3mL柱管/支

產(chǎn)品說明書1份

【需要而未提供的設(shè)備及試劑】

設(shè)備：

┅┅高速均質(zhì)器或組織勻漿機

┅┅粉碎機

┅┅200ml/50ml量筒

┅┅天平：感量0.1g

┅┅微量移液器：單道 100ml～1000ml

┅┅槽紋濾紙(折疊快速定性或定量濾紙)

┅┅玻璃微纖維濾紙(1.5mm孔徑)

┅┅50ml漏斗

┅┅一次性玻璃試管

┅┅泵流操作架(包括空氣泵，不同容積的玻璃注射器等)

試劑：

┅┅甲醇(色譜級)

┅┅蒸餾水或去離子水

┅┅pH7.0磷酸鹽緩沖溶液(PBS)：稱取8.0g氯化鈉，1.2g磷酸氫二鈉，0.2g磷酸二氫鉀，0.2g氯化鉀，用990mL純水溶解，然后用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7.0，最后用純水稀釋至1000mL

┅┅吐溫-20/PBS溶液(0.1%)：取1mL吐溫-20，加入PBS緩沖溶液并定容至1000mL

【試劑配制】

樣品提取液：根據(jù)不同的樣品配置不同濃度的甲醇水溶液，作為樣品提取液。

【樣本處理步驟】

(一)花生，玉米，大米，小麥及其制品，植物油脂和飼料

┅┅取25g粉碎的樣品(植物油脂直接取樣，無需處理)與125mL甲醇-水(7：3)溶液混合；

┅┅加入5.0g氯化鈉以均質(zhì)器高速攪拌，提取2分鐘；

┅┅4000r/min離心5min或用槽紋濾紙過濾；

┅┅取15mL濾液并加入30mL水稀釋，用玻璃微纖維濾紙過濾

┅┅取稀釋后液體待測；

┅┅將免疫親和柱連接于20.0mL玻璃注射器下。準(zhǔn)確移取15.0mL樣品提取液注入玻璃注射器；

┅┅將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調(diào)節(jié)壓力使溶液以約6mL/min流速緩慢通過免疫親和柱，直至2~3mL空氣通過柱體；

┅┅以10.0mL水淋洗柱子2次，棄去全部流出液，并使2mL~3mL空氣通過柱體；

┅┅準(zhǔn)確加入1.0mL色譜級甲醇洗脫，流速為1 mL/min ~2mL/min，收集全部洗脫液于玻璃試管中，供檢測用。

(二)醬油

┅┅取50g試樣與100mL甲醇-水(8：2)溶液混合；

┅┅加入2.5g氯化鈉以均質(zhì)器高速攪拌，提取1分鐘；

┅┅4000r/min離心5min或用槽紋濾紙過濾；

┅┅取10mL濾液并加入40mL水稀釋，用玻璃微纖維濾紙過濾

┅┅取稀釋后液體待測；

┅┅將免疫親和柱連接于10.0mL玻璃注射器下。準(zhǔn)確移取10.0mL樣品提取液注入玻璃注射器；

┅┅將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調(diào)節(jié)壓力使溶液以約6mL/min流速緩慢通過免疫親和柱，直至2~3mL空氣通過柱體；

┅┅用10.0mL 0.1%的吐溫/PBS清洗，再以10.0mL水淋洗柱子2次，棄去全部流出液，并使2mL~3mL空氣通過柱體；

┅┅準(zhǔn)確加入1.0mL色譜級甲醇洗脫，流速為1 mL/min ~2mL/min，收集全部洗脫液于玻璃試管中，供檢測用。

(三)食醋

┅┅取5g試樣，加入1.0g氯化鈉；

┅┅以pH7.0磷酸鹽緩沖溶液稀釋定容至25.0mL；

┅┅4000r/min離心5min或用槽紋濾紙過濾；

┅┅取10mL濾液并加入10mL水稀釋，用玻璃微纖維濾紙過濾

┅┅取稀釋后液體待測。

┅┅將免疫親和柱連接于10.0mL玻璃注射器下。準(zhǔn)確移取10.0mL樣品提取液注入玻璃注射器；

┅┅將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調(diào)節(jié)壓力使溶液以約6mL/min流速緩慢通過免疫親和柱，直至2~3mL空氣通過柱體；

┅┅用10.0mL 0.1%的吐溫/PBS清洗，再以10.0mL水淋洗柱子2次，棄去全部流出液，并使2mL~3mL空氣通過柱體；

┅┅準(zhǔn)確加入1.0mL色譜級甲醇洗脫，流速為1 mL/min ~2mL/min，收集全部洗脫液于玻璃試管中，供檢測用。

【結(jié)果判定】

經(jīng)免疫親和柱凈化后，收集到的甲醇洗脫液可直接使用熒光計或者HPLC檢測，也可使用薄層色譜或者酶聯(lián)免疫試劑盒進行檢測。收集到的1mL洗脫液中的黃曲霉毒素含量相當(dāng)于1g樣品中黃曲霉毒素含量。

【注意事項】

┅┅黃曲霉毒素危害極大，應(yīng)戴手套操作。

┅┅使用過的玻璃容器及黃曲霉毒素溶液最好用5%濃度的次氯酸鈉溶液浸泡過夜。

┅┅不要使用過了有效日期的免疫親和柱。

【貯藏條件及保存期】

貯藏條件：親和柱2-8℃保存，不可凍存

保存期：該產(chǎn)品有效期為12個月。

真菌毒素免疫親和柱