293細胞是轉(zhuǎn)染腺病毒E1A基因的人腎上皮細胞系，293T細胞由293細胞派生，同時表達SV40大T抗原，含有SV40復制起始點與啟動子區(qū)的質(zhì)粒可以復制。用Ca3(PO4）2轉(zhuǎn)染效率可高達50%。蛋白表達水平高，轉(zhuǎn)染后2-3天用堿性磷酸酶分析可較容易地檢測到表達的蛋白。瞬時轉(zhuǎn)染293T細胞是過表達蛋白并獲得細胞內(nèi)及細胞外（分泌的或膜）蛋白的便捷方式。
通常轉(zhuǎn)染效率與代數(shù)相關(guān)，建議選擇代數(shù)低的細胞進行轉(zhuǎn)染。如果質(zhì)粒中含SV40復制起始點，可以選擇293T或293T/17。這些細胞貼壁不牢，特別是溫度低于30攝氏度時很容易卷曲脫落，建議使用Cellbind細胞培養(yǎng)瓶培養(yǎng)。
293細胞培養(yǎng)特性：
1、293細胞明顯適應(yīng)酸性環(huán)境,pH值在6.9～7.1時,可順利貼壁生長,換液時動作要輕。一般用高糖的DMEM培養(yǎng)基。
2、傳代：倒去廢液，PBS洗一次（輕），用0.02%EDTA與0.25%Trypsin消化，生長良好細胞，培養(yǎng)瓶中輕搖,使之流遍所有細胞表面,即將其吸除或棄去消化30s，然后吸去，再讓剩下的EDTA/Trypsin作用30s,鏡下觀察細胞變圓,就可加DMEM終止消化，反復吹打至細胞全成單個懸浮細胞即可。12小時-24小時90%以上細胞貼壁。293細胞傳代時機為達80-90%匯合，傳代比例為1：3。
3、293細胞在低代時容易貼壁，生長良好，在傳到幾十代以后，易聚集成團，且貼壁不牢，用PBS沖洗時即可能脫落，即使消化后也不容易吹打成單細胞懸液，購入時先大量凍存。
4、復蘇：293細胞的另一生長特性是貼壁所需時間長且貼壁不牢。細胞冷凍后復蘇時,都有不同程度的腫脹,若以50ml培養(yǎng)瓶待細胞長滿瓶底的70%～80%時消化凍存,復蘇時將其全部接種至2個50ml瓶中時較為合適。剛復蘇的293貼壁很慢，復蘇接種后24小時內(nèi),應(yīng)盡量減少觀察細胞次數(shù)或不作觀察,以免因晃動而影響細胞貼壁。復蘇后48小時左右觀察貼壁情況并進行更換培養(yǎng)基比較合適,如果用一次性塑料培養(yǎng)瓶可增加細胞貼壁牢度。換液前宜將培養(yǎng)基預熱。
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