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　　人支氣管成纖維細胞是氣道與外界環(huán)境接觸的一道屏障，在慢性阻塞性肺疾病、哮喘、肺癌、肺囊性纖維化以及一些感染性呼吸道疾病的發(fā)病機制中均起著重要的作用，逐漸受到人們的重視。支氣管上皮細胞不僅是各種病原體、炎癥介質(zhì)作用的靶細胞，還作為效應(yīng)細胞合成、釋放多種炎性介質(zhì)和細胞因子，從而參與氣道炎癥及免疫反應(yīng)，而體外培養(yǎng)的原代支氣管上皮細胞由于與體內(nèi)原組織在形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能活動上存在很大的相似性，支氣管上皮細胞的原代培養(yǎng)成為研究呼吸道上皮功能的必要條件。

　　人支氣管成纖維細胞試驗方法：

　　1.體外培養(yǎng)人支氣管上皮細胞株，人胚肺成纖維細胞株，并建立人支氣管上皮細胞與人胚肺成纖維細胞共培養(yǎng)體系。

　　2.BRS-3激活、O3應(yīng)激支氣管上皮細胞后與肺成纖維細胞共培養(yǎng)，用MTT比色法檢測肺成纖維細胞及支氣管上皮細胞的增殖活性，羥脯氨酸試劑盒檢測成纖維細胞膠原合成的狀況。

　　3.為初步探討支氣管上皮細胞共培養(yǎng)對成纖維細胞的作用介質(zhì)，收集支氣管上皮細胞培養(yǎng)上清液，ELISA法及放射免疫分析法檢測TGF-β1、TNF-a、PGE2含量，并觀察其時間變化以及其含量與成纖維細胞活動的關(guān)系。

　　4.為證實共培養(yǎng)效應(yīng)的重要介質(zhì)為TGF-β1，TGF-β1反義寡核甘酸（ASO）設(shè)計，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染，MTT法檢測TGF-β1ASO轉(zhuǎn)染的支氣管上皮細胞對成纖維細胞的增殖活性。

　　5.為觀察支氣管上皮細胞TGF-β1表達是否受與成纖維細胞共培養(yǎng)的影響，用免疫組織化學(xué)法檢測單獨培養(yǎng)的HBECs與共培養(yǎng)的HBECS TGF-B1表達差異，并進行定量分析。