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一.   實(shí)驗(yàn)原理：試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被人結(jié)核桿菌（TB）IgG抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測(cè)定吸光度（OD 值），與CUT OFF值相比較，從而判定標(biāo)本中人結(jié)核桿菌（TB）的存在與否。

二.  人結(jié)核桿菌(TB)ELISA試劑盒 雙抗一步夾心法組成及其配置：

三.   常見問題解答：

1.     【高背景或陰性對(duì)照值偏高】

可能的原因：陰性對(duì)照孔被陽性對(duì)照或樣品污染；抗體非特異性結(jié)合；酶結(jié)合物過濃；孵育溫度過高；底物在使用前曝光；讀板前停留時(shí)間過長

上海軒澤康生物為您提供解決方案：洗滌時(shí)勿將洗液溢出孔外；建議更換封閉液；檢查酶結(jié)合物是否按照說明書規(guī)定稀釋；檢查孵育箱的溫度是否正確、穩(wěn)定；應(yīng)保存在暗處、避光；加終止液后3分鐘內(nèi)讀數(shù)。

2.     【陽性對(duì)照值偏低或低吸光度】

可能的原因: 試劑未平衡至室溫;檢測(cè)體積偏小;孵育時(shí)間過短;底物受污染;樣本中有抑制劑。

上海軒澤康生物為您提供解決方案：實(shí)驗(yàn)開始前，將試劑盒從冰箱內(nèi)取出平衡至室溫（20-25℃）；檢查移液器吸液通道是否堵塞；使用計(jì)時(shí)器，準(zhǔn)確孵育時(shí)間；使用新配置的試劑，重新實(shí)驗(yàn)；疊氮鈉會(huì)抑制HRP酶的活性。

四. 人結(jié)核桿菌(TB)ELISA試劑盒 雙抗一步夾心法操作注意事項(xiàng)：

1.  試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶溶解后再使用。

2.  實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

3.  預(yù)處理后的樣本請(qǐng)按照操作步驟用稀釋液適當(dāng)稀釋以達(dá)到試劑盒的的最佳檢測(cè)效果。

4.  嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻。