胎牛血清(Gibco北美)16000-044選擇指南：

在細胞培養(yǎng)過程中，經(jīng)常加入5%-20%的Gibco胎牛血清，常使用的Gibco胎牛血清濃度是10%。高濃度的血清可能改變細胞的基因表達譜，影響后續(xù)實驗的結果，我們在實驗中使用10%的Gibco澳洲胎牛血清培養(yǎng)293T細胞，效果非常好。但是有些細胞也會使用5%的Gibco胎牛血清或者20%的Gibco胎牛血清，要根據(jù)具體細胞選擇合適的Gibco胎牛血清濃度。

1、需要長期保存的Gibco牛血清，例如Gibco南美胎牛血清，必須儲存于-20℃ - 70℃ 低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月。切勿將血清在37℃放置太久，否則血清會變得渾濁，同時血清中的有效成分會被破壞，而影響血清質量。如果一次無法用完一瓶，可將40～45ml分裝于無菌50ml離心管中。由于血清結冰時體積會增加約10%，因此，血清在凍入低溫冰箱前，必須預留一定體積空間，否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。

2、一般廠商提供的血清為無菌，無需再過濾。如發(fā)現(xiàn)Gibco牛血清有懸浮物，例如Gibco北美胎牛血清中發(fā)現(xiàn)有懸浮物，則可將血清加入培養(yǎng)液內一起過濾，切勿直接過濾血清。

3、瓶裝Gibco胎牛血清南美解凍需采用逐步解凍法：-20℃至 -70℃低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天，然后移入室溫，待全部溶解后再分裝，一般以50ml無菌離心管可分裝40～45ml。在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一，減少沈淀的發(fā)生切勿直接將血清從-20℃進入37℃解凍，這樣因溫度改變太大，容易造成蛋白質凝集而出現(xiàn)沉淀。

4、熱滅活是指56℃，30分鐘加熱已*解凍的血清，加熱過程中須規(guī)則搖晃均勻，此熱處理的目的是使血清中的補體成分滅活，除非必須，一般不建議作此熱處理，因為熱處理會造成血清沉淀物顯著增多，而且還會影響血清的質量，補體參與反應有：細胞毒作用，平滑肌細胞收縮，肥大細胞和血小板釋放組胺， 增強吞噬作用，促進淋巴細胞和巨噬細胞發(fā)生化學趨化和活化。

5、胎牛血清(Gibco北美)16000-044中的沉淀物和絮狀物：主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成，這些絮狀物不會影響血清本身的質量，可用離心3000rpm，5分鐘去除，也可不用處理。顯微鏡下"小黑點"：經(jīng)過熱處理過的血清，沉淀物的形成會顯著增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀察象"小黑點"，常誤認為血清受污染。一般情況下，此小黑點不會影響細胞生長，但如果懷疑血清質量，則應立即停止使用，更換另一批號的血清。