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伊萊博生物科技(上海)有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第5年

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動(dòng)物組織石蠟包埋和切片實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)

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更新時(shí)間:2024-06-18 10:09:25瀏覽次數(shù):347次

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石蠟包埋能夠保護(hù)樣本、固定組織結(jié)構(gòu)、促進(jìn)切片和染色等

組織石蠟包埋和切片:

1、切取組織,浸泡在4%用pH7.4 BS配成的甲醛固定劑中,室溫24小時(shí)。

附:4%甲醛固定劑(5ml):4.5ml 1×PBS(pH7.4)+0.5ml甲醛

2、倒掉甲醛固定劑,加pH7.4 BS,每隔8小時(shí)更換一次,4℃保存,換液共3天。

3、打開烘箱,調(diào)溫至62℃,融石蠟。

4、酒精梯度脫水(30%、50%、70%、80%、90%、95%100×2),隔30分鐘更換一次。

5、50%酒精+50%二甲苯30分鐘(過渡步驟)。

6、100%二甲苯,時(shí)刻觀察組織塊至透明。

7、放入烘箱中已經(jīng)預(yù)融的50%石蠟+50%二甲苯中,30分鐘。

8、100%石蠟兩遍,每次2小時(shí)。(若石蠟浸潤(rùn)不夠,仍有二甲苯,則包埋后的石蠟塊較脆,易分層、斷裂。)

9100%石蠟紙盒內(nèi)凝固(先用蠟打底,再放入組織塊,澆上蠟包埋,放入4℃冰箱或水中冷凝,標(biāo)明組織塊放入方向),4℃存放備用。

10、修塊。

11、融化石蠟?zāi)ㄓ趬K底,貼在木塊上,壓實(shí)。

12、切片(510μm,將切片平展于平板上,光面朝上。

13、將光面朝下,將石蠟薄切片放于水面上(水溫40℃),使其伸展。(時(shí)間勿太長(zhǎng))。

14、將石蠟薄片貼在預(yù)先處理好的玻片上。

15、40℃烘烤過夜。



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