過氧化氫誘導動物模型造模方法

2.1、原理：根據(jù)黑色素不穩(wěn)定， 易受強氧化劑過氧化氫破壞的特性， 破壞皮膚黑色素， 使皮膚脫色，建立白dian風模型。

2.2、方法：體重 200 g 左右， 花黑色豚鼠， 雌雄各半， 背部脫毛， 脫毛面積約 4 cm × 4 cm。脫毛后用生理鹽水清洗脫毛局部， 局部脫毛區(qū)均無損傷。在脫毛區(qū)涂 5% 過氧化qing溶液 1 mL， 每天2 次， 上午和下午各 1 次 ( 每次 0. 5 mL， 每次先涂0. 25 mL，10 min后再同量涂 1 次) ， 連續(xù) 50 d， 可制備豚鼠白dian風模型。在此期間， 各組豚鼠每 3 d 脫毛 1 次。本模型可持續(xù) 50 -60 d。

3、莫諾苯宗乳膏脫色法制備小鼠白dian風模型

3.1、原理：通過 TYR與活性氧自由基( ROS) 的相互作用， 引起系統(tǒng)性的自身免疫反應(yīng)， 并作用于黑素細胞， 從而導致色素脫失， 與職業(yè)暴露性的白dian風無明顯差異。

3.2、方法 ：C57BL /6 小鼠， 雄性 ( 雌性) ， 體重20 g左右， 脫去背部黑色毛， 脫毛面積約 2 cm ×2 cm， 脫毛后用生理鹽水清洗脫毛局部， 局部脫毛區(qū)均無損傷。每天用刮勺稍用力涂抹 40% 莫諾苯宗乳膏 50 mg， 每天 1 次; 連續(xù) 50 d， 可制備小鼠白dian風模型。本模型可持續(xù) 50 -65 d。

過氧化氫誘導動物模型建模指標

表觀指標：色素多少、色素面積大小、干燥脫屑情況等為白dian風的主要表觀指標， 可對這些表觀指標進行量化積分或半量化分級。白dian風動物模型制備成功后， 病變局部無色素， 皮膚呈蒼白或白斑狀， 干燥伴明顯脫屑等。表觀指標是臨床白dian風的主要診斷依據(jù)， 也應(yīng)是模型判定的依據(jù)， 權(quán)重系數(shù) 0. 5。

病理指標：局部組織病理指標是高倍鏡下觀察含黑色素毛囊數(shù)、含黑素顆粒的細胞個數(shù) 。白dian風動物模型制備成功后局部組織形態(tài)觀察， 可見棘層明顯增厚， 角質(zhì)層增生明顯; 按 Lillie 硫酸ya鐵染色法黑色素染色試劑盒說明書進行黑色素染色， 黑色素毛囊數(shù)顯著降低; 高倍鏡下隨意觀察基底細胞和棘層細胞顆粒， 可見有黑素顆粒的細胞個數(shù)顯著減少。病理指標是白dian風動物模型病理變化的直接依據(jù)， 為直接相關(guān)指標， 權(quán)重系數(shù) 0. 3。

生化指標：白dian風的發(fā)生與體內(nèi)血清 TYR性密切相關(guān)， 與膽jian酯酶 ( CHE) ， 單 胺氧化酶( MAO) 活性， 丙二醛( MDA) ， 白細胞介素-6 ( IL-6)及腫瘤壞死因子-α( TNF-α) 含量等有一定關(guān)系。白dian風動物模型制備成功后， TYR 活性明顯下降，CHE 和 MAO 活性升高， MDA， IL-6 和 TNF-α 的含量均增加。生化指標是白dian風動物模型發(fā)生、發(fā)展、康復過程的機體反映， 有一定價值， 但特異性不高， 權(quán)重系數(shù) 0.2。