實(shí)驗(yàn)原理
軟骨組織由軟骨細(xì)胞和軟骨基質(zhì)組成,軟骨組織及其周圍的軟骨膜構(gòu)成軟骨。軟骨根據(jù)基質(zhì)內(nèi)所含纖維素成分不同分為透明軟骨、彈性軟骨、纖維軟骨。軟骨染色方法有很多種,例如甲苯胺藍(lán)法、阿利新藍(lán)法、番紅0法等。番紅0-固綠軟骨染色法的染色原理在于嗜堿性的軟骨與堿性染料番紅O結(jié)合呈現(xiàn)紅色,嗜酸性的骨和酸性染料固綠結(jié)合而呈綠色或藍(lán)色,與呈現(xiàn)紅色的軟骨對(duì)比鮮明,從而將軟骨組織與骨組織區(qū)分開。通過(guò)圖像分析軟件可對(duì)番紅0染色的軟骨基質(zhì)進(jìn)行定量分析。
染色步驟
(1 )骨組織固定、脫鈣,制成石蠟切片;
(2)切片常規(guī)脫蠟至水;
(3)入新鮮配制的Weigert染液染色;
(4)流水沖洗;
(4 )酸性乙醇分化液分化;
(5)蒸餾水洗;
(6)在固綠染色液內(nèi)浸染;
(7)蒸餾水洗;
(7)入番紅O染液內(nèi)浸染;
(8)蒸餾水洗;
(9 )用乙酸溶液洗滌切片,以便去除殘留的固綠,再用蒸餾水洗;
( 10)分別用95%乙醇、無(wú)水Z醇脫水;
(11)二甲苯透明,中性樹脂封固;
(12)鏡檢。