chip蛋白實驗技術(shù)服務(wù)

上海伊萊博生物科技有限公司成立于2005年，公司位于上海長江軟件園，實驗室面積600多平方米。公司目前具備較好的的生物學(xué)、醫(yī)學(xué)技術(shù)服務(wù)平臺，能夠為廣大客戶提供醫(yī)學(xué)科研樣本檢測、合作研究、開發(fā)及生產(chǎn)服務(wù)。

chip蛋白實驗技術(shù)服務(wù)操作流程： 
1 、樣品準(zhǔn)備與交聯(lián) 
細(xì)胞收集后，用37%的formaldehyde處理細(xì)胞，交聯(lián)核酸與DNA結(jié)合蛋白；
2. 超聲打斷染色質(zhì) 
裂解細(xì)胞，用Bioruptor將染色質(zhì)超聲破碎成200－1000bp片斷；將片段分為兩份，一份用于免疫共沉淀，一份用于對照。
3 、免疫共沉淀 (IP) 
取B步驟所得一份片斷與ChIP特異抗體結(jié)合進(jìn)行免疫共沉淀，利用免疫磁珠法富集抗體復(fù)合物。
4 、解交聯(lián)及純化 DNA 
將富集的DNA/蛋白復(fù)合物解交聯(lián)釋放DNA的片段，并進(jìn)行純化（IP DNA）；B步驟所得用于對照（Input DNA）的片斷作不進(jìn)行IP實驗，但也要解交聯(lián)并純化。
5 、 DNA 段 PCR 擴(kuò)增 
針對ChIP DNA, Input DNA及對照DNA的目的片段設(shè)計特異性引物并進(jìn)行熒光定量PCR擴(kuò)增。
 6 、結(jié)果分析 
%Input=2(CtInput-CtChIP)×Fd×
Fold Enrichment = [%(ChIP/Input)] / [%( Negative control/Input)] 

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