病毒包裝,慢病毒包裝的存在是因為，在基因功能的研究過程中，通過使用慢病毒介導(dǎo)的方法能夠大大提高基因的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率，達到目的基因高效表達的目的。慢病毒主要應(yīng)用于shRNA、LncRNA、cDNA以及報告基因的研究，具有以下特點：
1）適用于難轉(zhuǎn)染的細胞，如干細胞、原代細胞等，可很大程度的提高基因轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。
2）慢病毒整合細胞基因組，可進行穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株的篩選。
3）高純度的慢病毒可用于活體動物模型。
病毒包裝跟慢病毒包裝步驟一樣：
1）轉(zhuǎn)染前1天，將293T細胞接種于10 CM培養(yǎng)皿中，加入15 mL含10％FBS的DMEM培養(yǎng)液，置37℃，5％CO2培養(yǎng)至約70－80％融合時，進行細胞轉(zhuǎn)染。
2）轉(zhuǎn)染293T細胞
（1）將慢病毒表達質(zhì)粒和包裝質(zhì)粒加入到Opti-MEM中，混勻。
?。?）將適量的Lipofectamine? 2000 (invitrogen)加入到Opti-MEM中，混勻。
?。?）5分鐘后，將上述兩混合液混勻，室溫靜置20分種后，將混合液加入至培養(yǎng)皿中，前后左右晃動搖勻。置37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3）6小時后，換含10％FBS的DMEM培養(yǎng)液10mL。
4）轉(zhuǎn)染48小時后，收集病毒上清，500g離心10分鐘，0.45 μm濾器過濾。
5）濃縮純化后，分裝，-80℃保存。
慢病毒包裝原理
慢病毒表達質(zhì)粒包含了包裝、感染、穩(wěn)定整合宿主細胞基因組所需的遺傳信息，包裝輔助質(zhì)粒則提供了所有的轉(zhuǎn)錄、包裝和重組假病毒所需要的輔助蛋白。為產(chǎn)出高滴度的病毒顆粒，通常將表達質(zhì)粒和包裝質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)染至包裝細胞中進行病毒的包裝。包裝好的假病毒顆粒分泌到細胞外培養(yǎng)液中。通過收集含病毒顆粒的上清，進行濃縮和純化可獲得高純度和高滴度的慢病毒。
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