多重?zé)晒饷庖呓M化技術(shù)廣泛應(yīng)用于多個(gè)領(lǐng)域:
單細(xì)胞分析:能夠在單個(gè)細(xì)胞水平上同時(shí)檢測(cè)多種蛋白質(zhì)的表達(dá)。
芯片分析:在生物芯片上實(shí)現(xiàn)高通量的多重蛋白質(zhì)檢測(cè)。
組織形態(tài)和功能分析:研究組織中不同蛋白質(zhì)的空間分布和相互關(guān)系。
腫瘤微環(huán)境分析:全景式地分析腫瘤免疫浸潤、免疫檢查點(diǎn)、腫瘤細(xì)胞與免疫細(xì)胞的空間關(guān)系等。
自身免疫疾病分析:探究自身免疫疾病的發(fā)病機(jī)制和病程進(jìn)展。
排異反應(yīng)評(píng)估:監(jiān)測(cè)和評(píng)估后的免疫排異反應(yīng)。
多重?zé)晒饷庖呓M化檢測(cè)的大致步驟如下:
取樣:獲取待檢測(cè)的組織樣本,通常采用切片方法。
固定處理:用甲醛或乙醇等物質(zhì)對(duì)組織樣本進(jìn)行固定,以保持其形態(tài)結(jié)構(gòu)。
切片處理:將固定后的組織切成薄片,通常厚度為4-5微米。
抗體標(biāo)記:選擇特定的抗體對(duì)目標(biāo)蛋白質(zhì)進(jìn)行標(biāo)記,這些抗體通常與熒光素或酶等物質(zhì)結(jié)合。
TSA放大:利用TSA技術(shù)進(jìn)行信號(hào)放大,使熒光素在抗原-抗體結(jié)合部位大量沉積。
染色處理:通過熒光染色方法將標(biāo)記的抗體與特定的組織細(xì)胞結(jié)合。
圖像采集與分析:使用熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡采集圖像,并進(jìn)行定量和定性分析。
多重?zé)晒饷庖呓M化的圖像分析方法包括:
定性分析:通過觀察熒光信號(hào)的分布和強(qiáng)度,判斷目標(biāo)蛋白質(zhì)在組織中的表達(dá)和定位。
定量分析:利用圖像處理軟件對(duì)熒光信號(hào)進(jìn)行量化,比較不同樣本或不同條件下的蛋白質(zhì)表達(dá)差異。
共定位分析:分析不同熒光信號(hào)之間的空間關(guān)系,探究蛋白質(zhì)之間的相互作用和共定位情況。
通過這些分析方法,多重?zé)晒饷庖呓M化技術(shù)能夠提供豐富的生物學(xué)信息,有助于深入理解細(xì)胞的生理和病理過程。