tunel細胞凋亡檢測服務會用到伊文思藍染色液( Evans blue漢稱偶氮藍,分子式C34H24NNa4O14S4,分子量為96080
CAS號為314-13-6伊文思藍與臺盼藍都是細胞活性染料,常用于檢測細胞膜的完整性和細胞是否存活。
操作步驟:
(一)血腦屏障通透性
1、取處理后的實驗動物(以小鼠為例,靜脈注射 Evans blue stain(0.5%小鼠眼睛、皮膚出現(xiàn)藍色。0.5~1h后處死小鼠
2、腦組織腦組織置于15m離心管中,加入1 m pbs,迅速用組織勻漿器將腦組織制成勻漿
3、取上清,加入等量三lu乙酸,4℃孵育。3、取上清,按上清:丙酮=3:7比例加入丙酮,室溫孵育24h 4、離心15min5、取上述溶液,用分光光度計測620nm處吸光值OD值)。同時測定已知不同梯度的標準依文思藍的○D值,繪制標準曲線。根據(jù)標準曲線計算出待測待測樣品的依文思藍含
(二)活細胞染色
1、取100μ重懸細胞到常規(guī)離心管內,入10oμ Evans blue stair輕輕混勻染色染色時間可適當延長,但不宜超過10min)
2、吸取少量經過染色后的細胞。通常如果要比較精確地進行定量,每個細胞樣品至少數(shù)500個細胞,數(shù)出藍色細胞和細胞總數(shù)。
細胞存活率計算公式如下細胞存活率=(細胞總數(shù)-藍色細胞數(shù))/細胞總數(shù)x100%
此產品只用于科研,不作用于人體