二十碳三烯酸甲酯（順-11,14,17）（C20:3）

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慢病毒感染快速指南

1. 將目的細胞按 30%匯合度接種到 24 孔板，約 3-5×104細胞數(shù)/孔，不同細胞因為細胞大小不同細胞數(shù)量會不同，快速指南以細胞數(shù)量為 5×104為例，加入 500uL wan全培養(yǎng)基進行細胞培養(yǎng)。

2. 接種后 12-20h 感染陰性對照慢病毒（接種細胞至病毒感染細胞時間不宜太長，否則細胞增殖影響細胞密度不利用后期抗性篩選）。

3.加病毒量計算方法：（細胞數(shù)×MOI 值/病毒滴度）×103=病毒量（uL），加病毒量見下表。同時加入 Polybrene，每孔加 0.25uL，濃度為 10mg/mL Polybrene，細胞培養(yǎng)液中終濃度為5ug/mL。

4.感染 16-20h 后更換培養(yǎng)基，棄去培養(yǎng)基，每孔加入 500uL 新鮮的培養(yǎng)基。

5.感染后 48-96h 顯微鏡觀察熒光。（注：如果 48h-96h 期間細胞匯合度達到 100%，請及時傳代培養(yǎng)）。

6.建議將 48 孔板細胞進行傳代，傳代 12 孔板，后繼續(xù)觀察熒光，根據(jù)細胞狀態(tài)和熒光細胞比例綜合判斷細胞感染最佳 MOI 值。一般選擇細胞生長良好，感染效率 80%左右的感染條件作為最佳感染條件。（注：100%熒光感染不一定為細胞最佳 MOI 值，因為可能會造成細胞慢病毒感染拷貝數(shù)太高，影響細胞狀態(tài)。