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人利什曼?。↙SM)ELISA檢測試劑盒 使用說明書
閱讀:442 發(fā)布時間:2018-11-19本試劑盒只能用于科學研究,不得用于醫(yī)學診斷
人利什曼?。↙SM)ELISA檢測試劑盒
使用說明書
檢測原理
試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被人利什曼?。↙SM)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入陰性對照、陽性對照、樣本、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人利什曼?。↙SM)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),判斷樣品是否含有人利什曼?。↙SM)。
樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
- 酶標儀(450nm)
- 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
- 37℃恒溫箱
操作注意事項
- 試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,這屬于正?,F(xiàn)象,水浴加熱使結晶*溶解后再使用。
- 實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。
- 預處理后的樣本無需稀釋,直接取10μL加樣即可。
- 嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
- 所有液體組分使用前充分搖勻。
試劑盒組成
名稱 | 96孔配置 | 48孔配置 | 備注 |
微孔酶標板 | 96孔 | 48孔 | 無 |
陰性對照 | 0.3mL | 0.3mL | 無 |
陽性對照 | 0.3mL | 0.3mL | 無 |
樣本稀釋液 | 6mL | 3mL | 無 |
檢測抗體-HRP | 10mL | 5mL | 無 |
20×洗滌緩沖液 | 25mL | 15mL | 按說明書進行稀釋 |
底物A | 6mL | 3mL | 無 |
底物B | 6mL | 3mL | 無 |
終止液 | 6mL | 3mL | 無 |
封板膜 | 2張 | 2張 | 無 |
說明書 | 1份 | 1份 | 無 |
自封袋 | 1個 | 1個 | 無 |
試劑的準備
20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。
洗板方法
- 手工洗板:甩盡孔內液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。
- 自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。
操作步驟
- 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
- 設置陰、陽性對照孔和樣本孔,陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照各50μL;
- 待測樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;
- 隨后陰、陽性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
- 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
- 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
- 每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。
結果判斷
1. 試驗有效性:陽性對照孔OD值平均值≥1.00;
陰性對照孔OD值平均值≤0.15。
2. 臨界值(Cut off)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
3. 陰性判斷:樣品OD值<臨界值(Cut off),樣品為陰性
4. 陽性判斷:樣品OD值>臨界值(Cut off),樣品為陽性
試劑盒性能
- 準確性:陽性對照孔OD值平均值≥1.00;陰性對照孔OD值平均值≤0.15,說明試驗結果有效。
- 特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
- 重復性:板內、板間變異系數(shù)均小于15%。
- 貯藏:2-8℃,避光防潮保存。
- 有效期:6個月
免責聲明
1. 試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實驗或人體實驗,否則所產(chǎn)生的一切后果,由實驗者承擔,本公司概不負責。
2. 嚴格按照說明書操作,實驗者違反說明書操作,后果由實驗者承擔。