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一，宿主DNA殘留控制的法規(guī)要求
隨著生物醫(yī)藥行業(yè)的快速發(fā)展，越來越多的生物制品開始服務(wù)于人類健康，治療性抗體藥物、細(xì)胞治療、病毒載體疫苗等需求日益龐大。不同于傳統(tǒng)口服類藥物，大量生物制品通過注射等給藥方式直接進入體內(nèi)，因此更需要嚴(yán)格的質(zhì)量監(jiān)管來保證生物制品的安全性和有效性。宿主核酸的殘留因其可能帶來的傳染性或者致瘤的風(fēng),險而被作為生物制品安全監(jiān)管中的重要一項。WHO及世界各國對宿主核酸的殘留都有嚴(yán)格的規(guī)定如疫苗及治療類生物制品的DNA殘留量通常控制在100pg/劑量以下，部分產(chǎn)品甚至要求DNA殘留量不高于10pg/劑量。因此，解決宿主核酸的殘留是生物制品生產(chǎn)過程中必須面對的問題。全能核酸酶是一種來源于SerratiaMarcescen的基因工程酶，它可以降解所有形式的DNA和RNA，包括單鏈、雙鏈、線狀、環(huán)狀、天然以及變性的核酸，將它們消化成3-5個堿基長度的5'-單磷酸寡核苷酸，且不具有堿基識別特異性。因此，在一些藥物的生產(chǎn)工藝中常使用全能核酸酶去除殘留核酸，如能有效去除疫苗樣品、細(xì)胞和基因治療病毒樣品及重組蛋白藥物中的核酸污染，降低核酸殘留毒性風(fēng)險，提高產(chǎn)品安全性;另外，在蛋白分析樣品制備、改善重組蛋白純化工藝、提高蛋白產(chǎn)量、細(xì)胞凍存等方面也可通過使用全能核酸酶處理核酸來達到理想實驗效果。
二，常規(guī)全能核酸酶在工業(yè)生產(chǎn)中的限制
基于此，常使用全能核酸酶應(yīng)用于藥物開發(fā)生產(chǎn)工藝流程中來去除核酸污染。如在AAV病毒生產(chǎn)中，經(jīng)宿主細(xì)胞大量擴增，在細(xì)胞裂解后，往往需要加入全能核酸酶來去除核酸污染，同時可以降低粘樣品粘稠度，便干后續(xù)上柱純化，但在此過程中，鹽是各種純化方案的重要組成部分，鹽濃度的提高可有效地減少AAV病毒顆粒的聚集，提高AAV病毒顆粒產(chǎn)率。因此常使用含有較高鹽濃度的buffer(400-500mM)來提高病毒收率，而常規(guī)版本全能核酸酶的酶活會隨著鹽濃度升高而急劇下降，實際使用中，常需要通過增加酶的用量或延長孵育時間來提高純化效果，但這無疑增加了成本和工藝復(fù)雜度。
為更好滿足高鹽環(huán)境對全能核酸酶的活性要求，逐典生物依托酶改造技術(shù)平臺，通過A1設(shè)計極大拓寬全能核酸酶產(chǎn)品的最適催化鹽濃度范圍，終產(chǎn)品在150-900 mM鹽濃度范圍內(nèi)有效，超出客戶預(yù)期，是生物藥工藝流程中去除核酸污染的理想選擇!
三，逐典耐高鹽全能核酸酶優(yōu)勢
1.更高鹽耐受度
當(dāng)鹽離子濃度在600~700mM時，初代全能核酸酶幾近失活，而SAN仍能保持較高活性。
圖1.不同鹽濃度下耐高鹽全能核酸酶(SAN)與初代全能核酸酶活性對比
2. 高效核酸降解力
同對照組相比，添加SAN后能夠有效去除核酸殘留。
圖2 加入SAN 前后的消化效果圖
四，逐典耐高鹽全能核酸酶用途
1.疫苗和病毒樣品制備中高鹽環(huán)境下DNA污染的去除
2.與細(xì)胞或細(xì)菌裂解液配合使用，去除粗提物中的核酸，降低溶液粘性，提高蛋白質(zhì)產(chǎn)量。
3.減少存放的外周血單細(xì)胞(PBMC)的結(jié)塊現(xiàn)象
4.降解核酸，利于不可溶性蛋白復(fù)性前高質(zhì)量包涵體制備。
5.有效去除帶負(fù)電荷的核酸對雙向SDS-PAGE蛋白樣品的影響，改善蛋白質(zhì)分離效果，增強2-DE分辨率
五，客戶應(yīng)用案例
