HT144人惡性黑色素瘤細(xì)胞

組織來源：皮膚
培養(yǎng)條件：McCoy 5a+10%FBS
形      態(tài)：貼壁；成纖維細(xì)胞樣

1. 在HT-144細(xì)胞還沒有*長滿的時(shí)候就要傳代，覆蓋瓶底大約70%的時(shí)候就開始傳代；

2.不存在消化時(shí)間太長的說法，我的細(xì)胞所有的細(xì)胞都在37°消化5-10分鐘，你的一分鐘肯定不會(huì)有問題；

3.明確你的消化液里面有沒有EDTA，這個(gè)東西會(huì)很強(qiáng)烈地抑制細(xì)胞貼壁，如果有的話，你要用新的瓶子傳代，原來的培養(yǎng)瓶或者培養(yǎng)皿都不要了，這樣會(huì)好些，如果你要反復(fù)使用培養(yǎng)皿的話，要用大量的PBS洗，再用含血清的培養(yǎng)基洗一次才能繼續(xù)用；

4.你消化HT-144細(xì)胞之后有沒有離心清洗細(xì)胞，細(xì)胞消化下來之后要用含10ml血清的培養(yǎng)基離心洗一次；

0.05%的胰酶還是0.25%的胰酶原理是底濃度胰酶作用時(shí)間長些，細(xì)胞能盡量散些是目的，胰酶保存的好，效果就好。

消化之前先用PBS洗兩次，然后加0.05%的胰酶消化2min，然后把胰酶吸棄，利用余下的胰酶消化3-5min（室溫或培養(yǎng)箱），HT-144;人惡性黑色素瘤細(xì)胞；HT-144細(xì)胞這期間每隔一分鐘在顯微鏡下觀察，看到細(xì)胞差不多都變圓了、且側(cè)立細(xì)胞有滑落的趨勢(shì)，加2ml培養(yǎng)基吹打，吹成單細(xì)胞懸液。我的細(xì)胞這樣差不多就能吹散了。

HT-144細(xì)胞一團(tuán)一團(tuán)的，是傳代的時(shí)候沒吹散。37度消化4分鐘，拿前面較細(xì)的1ml槍頭吹的，然后就差不多能成單細(xì)胞了。你可以吹完后把它轉(zhuǎn)移到離心管中，讓它自然沉降8-10分鐘，然后取上層的細(xì)胞傳代，情況會(huì)好很多。

細(xì)胞聚團(tuán)還有一種可能是您使用的胎牛血清營養(yǎng)成份不夠，建議復(fù)蘇一只新的細(xì)胞再培養(yǎng)。

HT144人惡性黑色素瘤細(xì)胞

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