Romas人B淋巴細胞瘤細胞

根據(jù)細胞生長的特點，傳代方法有3種：

（1）懸浮生長細胞傳代

離心法傳代：離心（1000轉(zhuǎn)/分）去上清，沉淀物加新培養(yǎng)液后再混勻傳代。

直接傳代法：懸浮細胞沉淀在瓶壁時，將上清培養(yǎng)液去除1/2-2/3，然后用吸管直接吹打形成細胞懸液再傳代。

（2）半懸浮生長細胞傳代（HeIa細胞）

此類細胞部分呈現(xiàn)貼壁生長現(xiàn)象，但貼壁不牢，可用直接吹。

打法使細胞從瓶壁脫落下來，進行傳代。

（3）貼壁生長細胞傳代

采用酶消化法傳代，常用的消化液有0.25%的胰蛋白酶液。xy-6437R    ANKRD53錨蛋白重復(fù)域53抗體

懸浮細胞接收后的操作流程與注意事項
1.如簽收時出現(xiàn)培養(yǎng)瓶壁破裂，漏液等情況請及時做好照片記錄并聯(lián)系實驗室 
2.擰松瓶蓋，細胞瓶豎立培養(yǎng)8h（或過夜）
3.待細胞沉底后吸除上層液體（含碎片殘渣，請小心操作），然后吸取沉底的細胞層（2ML左右轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶，加入新鮮的*培養(yǎng)基（如細胞狀態(tài)較差可將血清濃度調(diào)高到15%）繼續(xù)培養(yǎng)
 
懸浮細胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程（請嚴格遵照無菌操作）
1.將培養(yǎng)瓶/皿中的細胞重懸混勻
2.吸取2/3或者一半混勻后的細胞懸液到新的培養(yǎng)瓶/皿
3.分別在原瓶/皿和新分瓶的培養(yǎng)瓶/皿加入等量或者2倍的新鮮培養(yǎng)基，使細胞密度保持在5 X10(5) /ml左右
4.注意培養(yǎng)基PH值變化情況和細胞密度，定期半量換液（每周2-3次），待細胞密度大于2 X 10(6) /ml以后重復(fù)1項操作或者凍存

Romas人B淋巴細胞瘤細胞

貼壁細胞接收后的操作流程與注意事項
1.收到細胞當天盡快更換新鮮*培養(yǎng)基，第二天再進行消化處理
2.如果細胞收到時呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài)，請將懸浮的細胞即時離心，加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)觀察。同時原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基，培養(yǎng)觀察
3.若出現(xiàn)生長不均：貼壁細胞若出現(xiàn)分布不均，成島狀生長，可將細胞進行消化，重懸打散細胞，加入新鮮培養(yǎng)基進行培養(yǎng)

貼壁細胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程（請嚴格遵照無菌操作）
1.吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤洗細胞兩次，加適量0.25%胰酶進行消化細胞（注意把握消化時間）
2.鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時（不建議消化到細胞漂浮）去掉胰酶，加6~8ml *培養(yǎng)基，輕輕吹打細胞層，盡量把細胞層吹落，吹散
3.取部分細胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當?shù)?培養(yǎng)基，把細胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)
4.注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細胞密度達到80%以后重復(fù)1項作或者凍存