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無血清細(xì)胞凍存液操作步驟
細(xì)胞凍存是細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中細(xì)胞進(jìn)行保種并長(zhǎng)期保存的常用方法，其中細(xì)胞凍存液，作為細(xì)胞凍存時(shí)必須使用的一種溶液，不僅僅是說只是用來進(jìn)行細(xì)胞的保存，在細(xì)胞的購(gòu)買、寄贈(zèng)、交換和運(yùn)送過程中也起著關(guān)鍵作用，因此選擇一款好的細(xì)胞凍存液就尤為重要。
無血清細(xì)胞凍存液是指不含血清和動(dòng)物源成分的細(xì)胞凍存液，對(duì)比傳統(tǒng)細(xì)胞凍存液存在的優(yōu)勢(shì)：
1.是一種通用型的細(xì)胞凍存液，可用于凍存人和各種動(dòng)物細(xì)胞株；
2.凍存液配方，即開即用，方便快捷；
3.非程序降溫，-80℃低溫冰箱長(zhǎng)期凍存，也可液氮凍存；
4.特別配方（主要成分為DMSO和氨基酸）具有有效提高細(xì)胞凍存活率和復(fù)蘇活力；
5.不含動(dòng)物來源性蛋白，能減少各類病毒、霉菌和支原體等的污染，確保凍存細(xì)胞安全；
6.可孔板（細(xì)胞培養(yǎng)板）凍存，可用于雜交瘤細(xì)胞的凍存液.
無血清細(xì)胞凍存液操作步驟，簡(jiǎn)單、方便：
一、細(xì)胞冷凍保存方法：
選擇凍存處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞有助于提高復(fù)蘇細(xì)胞存活率。
凍存管凍存方式：
1、按照常用方法收集懸浮細(xì)胞或貼壁細(xì)胞于試管中。
2、按照培養(yǎng)細(xì)胞密度和所用細(xì)胞凍存管的尺寸計(jì)算所需凍存細(xì)胞數(shù)。（參考：5×105至5×106 cells/ml）。
3、取相當(dāng)于所需細(xì)胞數(shù)的細(xì)胞懸浮液量，置于離心管中，離心收集培養(yǎng)細(xì)胞（參考離心條件：1,000~2,000 rpm，4℃，3~5 min）。移去離心管中的上清液。
4、加入適量無血清細(xì)胞凍存液于離心管中，使細(xì)胞濃度為5×105至5×106 cells/ml。緩慢混合均勻，制成細(xì)胞混合液。
5、將離心管中的細(xì)胞混合液分裝于已標(biāo)示的冷凍保存管中。
6、直接將含細(xì)胞懸液的凍存管放入-80℃冰箱，冷凍保存。
7、若研究者需要液氮保存時(shí)，可先放入-80℃冰箱過夜后，再移至-196℃液氮罐。
原位凍存方式：
1、從培養(yǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞培養(yǎng)板中將培養(yǎng)基上清吸取干凈。
2、加入適量無血清細(xì)胞凍存液于培養(yǎng)孔板中，充分浸潤(rùn)細(xì)胞。
3、蓋上蓋板，做好密封措施，防止染菌。
4、直接將含凍存液的細(xì)胞培養(yǎng)板放入-80℃冰箱，冷凍保存。
二、凍存細(xì)胞復(fù)蘇方法
凍存管復(fù)蘇方式：
1、從冰箱取出凍存細(xì)胞管，立即放入37℃水浴槽中快速解凍。
2、待凍存的細(xì)胞懸液融化后，立即加入1 ml細(xì)胞培養(yǎng)基于該冷凍管中與細(xì)胞混合，再將細(xì)胞混合液從凍存管中移入含有9 ml該細(xì)胞培養(yǎng)基的試管中，混合均勻。
3、離心收集培養(yǎng)細(xì)胞（參考離心條件：1,000~2,000 rpm，4℃，3~5 min），移去上清液。
4、清洗細(xì)胞，充分洗凈殘留凍存液。
5、加入適量新鮮培養(yǎng)基，使用移液管緩緩地均勻細(xì)胞混合液。適量地稀釋后，將細(xì)胞混合液移至事先準(zhǔn)備好的培養(yǎng)瓶中。
6、鏡檢后，研究者可根據(jù)各自方法和需要來進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。
原位復(fù)蘇方式：
1、從冰箱取出凍存培養(yǎng)板，立即放入37℃水浴槽中快速解凍。
2、待凍存的細(xì)胞懸液融化后，輕輕吸去細(xì)胞凍存液，按照常規(guī)換液操作加入新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)。