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Lipo3000細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑的使用注意事項(xiàng)
Lipo3000細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染效率高，細(xì)胞毒性小，適合各種核酸分子或蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞轉(zhuǎn)染是外源基因進(jìn)入真核細(xì)胞的一種重要方法。這些外源DNA或RNA通過(guò)轉(zhuǎn)染試劑的包裝輔助才能順利進(jìn)入細(xì)胞，發(fā)揮相應(yīng)的作用，進(jìn)而研究其細(xì)胞功能及相應(yīng)的影響。廣泛應(yīng)用于基因功能研究、調(diào)控基因表達(dá)、癌癥、疾病模型相關(guān)研究和重組蛋白研究等生物學(xué)試驗(yàn)。
1.質(zhì)粒質(zhì)量：請(qǐng)務(wù)必使用高純度無(wú)內(nèi)毒素轉(zhuǎn)染級(jí)質(zhì)粒。通過(guò)260nm光吸收測(cè)定DNA濃度，260nm/280nm比值確定DNA純度（比值應(yīng)該在1.8～2.0的范圍之內(nèi)）。如有可能，請(qǐng)通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)質(zhì)粒的完整性。
2.細(xì)胞條件：使用適當(dāng)保存和經(jīng)常傳代的健康細(xì)胞。確保細(xì)胞沒(méi)有被細(xì)菌、真菌或支原體污染。如果細(xì)胞是近期復(fù)蘇的液氮凍存細(xì)胞，請(qǐng)?jiān)谵D(zhuǎn)染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者李記生物的胎牛血清培養(yǎng)細(xì)胞。
3.細(xì)胞培養(yǎng)液要求：EZTrans細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑可用于有血清培養(yǎng)基的轉(zhuǎn)染，并且轉(zhuǎn)染前不需要換培養(yǎng)基。但是，制備轉(zhuǎn)染復(fù)合物時(shí)要求用無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋DNA和轉(zhuǎn)染試劑，因?yàn)檠鍟?huì)影響復(fù)合物的形成。確保細(xì)胞培養(yǎng)液沒(méi)有被細(xì)菌、真菌或支原體污染。轉(zhuǎn)染時(shí)培養(yǎng)液中不添加抗生素。
4.DNA濃度和EZTrans細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑量的優(yōu)化：DNA濃度和轉(zhuǎn)染試劑使用量受細(xì)胞類(lèi)型及其他實(shí)驗(yàn)條件影響，初次使用應(yīng)優(yōu)化DNA濃度和轉(zhuǎn)染試劑量以得到最大的轉(zhuǎn)染效率。使用者可嘗試每1μgDNA使用1～4μL體積線(xiàn)性PEI轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行優(yōu)化。DNA和轉(zhuǎn)染試劑的比例，通常推薦是1:2~1:5。