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淺析細(xì)胞體外培養(yǎng)的三大污染原因
細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是離體方法中主要的一種，是從動物體內(nèi)取出細(xì)胞，模擬體內(nèi)的生理環(huán)境，在無菌、適溫、豐富的營養(yǎng)條件下，使離體細(xì)胞生存、生長并維持結(jié)構(gòu)和功能的一門技術(shù)。細(xì)胞實驗是科學(xué)探究的基礎(chǔ)，細(xì)胞實驗服務(wù)可以提供包括細(xì)胞侵襲檢測、細(xì)胞劃痕檢測以及細(xì)胞增殖實驗等的研究。細(xì)胞體外培養(yǎng)實驗對于科學(xué)研究至關(guān)重要，然而在細(xì)胞培養(yǎng)中，常會因為不適宜的環(huán)境條件以及不得當(dāng)?shù)牟僮鲗?dǎo)致細(xì)胞被污染。在細(xì)胞培養(yǎng)實驗中如何避免污染是一項很重要的工作，現(xiàn)在我們來看一下細(xì)胞體外培養(yǎng)中常見的污染種類，以及避免方法。
1、外源性污染
外源性污染中應(yīng)注意實驗室內(nèi)空氣保持潔凈，定期清掃、紫外消毒，操作者嚴(yán)格按照無菌操作進行。由于離體細(xì)胞對各種毒物都很敏感，所以細(xì)胞培養(yǎng)所用器材的清洗、消毒處理非常關(guān)鍵。
培養(yǎng)所用的物品器具要*清洗消毒，超凈臺的物品擺放要井然有序，避免反復(fù)燒烤已經(jīng)高溫滅菌的物品以及避免因細(xì)胞株種類過多而引起的細(xì)胞間交叉污染。細(xì)胞實驗室的構(gòu)建也是各個細(xì)胞實驗服務(wù)公司*的實驗室，實驗室需要配備CO2培養(yǎng)箱、超凈工作臺/生物安全柜、純水系統(tǒng)以及液氮罐等設(shè)備，同時需要保證細(xì)胞實驗室的干凈與整潔。
2、支原體污染
支原體是一種沒有細(xì)胞壁的原核生物，大多呈不規(guī)則球狀或絲狀，由于它的直徑?。s為0.15-2 µm），而且形狀靈活，所以能逃過實驗室常用的濾膜。在光學(xué)顯微鏡下支原體不可見，對培養(yǎng)基的需求有限，一般不會引起培養(yǎng)物混濁，因此支原體像藥物一般殺細(xì)胞于無形之中。細(xì)胞被支原體污染后，其生長繁殖和形態(tài)、代謝及功能、染色體及免疫細(xì)胞產(chǎn)量均會受到影響，支原體污染能夠消耗營養(yǎng)物，促進代謝積累，導(dǎo)致PH改變，誘導(dǎo)或抑制細(xì)胞因子表達(dá)，并改變培養(yǎng)細(xì)胞的代謝、增殖特征以及形態(tài)。
據(jù)一些資料報道，支原體污染在細(xì)胞體外培養(yǎng)過程中發(fā)生率高達(dá)15%~80%。為了避免支原體污染的發(fā)生，對培養(yǎng)物進行常規(guī)的支原體檢測非常重要，應(yīng)嚴(yán)格按照細(xì)胞培養(yǎng)操作程序進行操作、確保適宜的環(huán)境條件、嚴(yán)格的無菌觀念操作、定期清潔消毒、任何培養(yǎng)用液使用前均進行無菌檢查、只引進來源可靠的細(xì)胞，同時一旦發(fā)現(xiàn)污染的細(xì)胞應(yīng)滅活棄之避免進一步污染擴散。美迪西提供細(xì)胞實驗服務(wù)，其生物部在分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、體外生物學(xué)和結(jié)構(gòu)生物學(xué)領(lǐng)域有豐富廣泛的經(jīng)驗。從初的cDNA文庫構(gòu)建到藥物設(shè)計，通過蛋白質(zhì)純化，結(jié)構(gòu)測定和分析測定，提供一套完整的生物學(xué)服務(wù)。
3、霉菌污染
霉菌污染也是細(xì)胞培養(yǎng)過程中常見的一個問題，如果細(xì)胞被霉菌污染后，在低倍鏡下可見乳白色的團狀漂浮物，培養(yǎng)液無變化。高倍鏡下可見明顯的菌絲，細(xì)胞活力變差，生長速度明顯變慢，甚至死亡。細(xì)胞被霉菌污染時，若非價值很高的珍貴細(xì)胞一般選擇扔掉，且相關(guān)的容器也要做嚴(yán)格處理。有文獻(xiàn)報道，低速離心法可去除細(xì)胞培養(yǎng)中的霉菌污染，不僅實驗條件簡單，能*去除霉菌，且所用時間短．并能將不良反應(yīng)降至低程度。
細(xì)胞體外培養(yǎng)中常見的污染種類除了上述之外，還有真菌、病毒原蟲等污染，不管是何種類型的污染，總之在細(xì)胞體外培養(yǎng)實驗中，預(yù)防污染的方法是良好的細(xì)胞培養(yǎng)技巧和正確的態(tài)度。同時在體外細(xì)胞培養(yǎng)時，還需要主動避免細(xì)胞實驗對人的影響。實驗人員需要注意一些操作細(xì)節(jié)．如避免由于眼睛及皮膚長時間暴露在紫外線下造成的損傷，同時避免由于誤照引起的電光性眼炎。紫外線燈在消毒時可產(chǎn)生刺激人體呼吸道黏膜的臭氧，臭氧過多時也會引起中毒反應(yīng)，所以為避免損傷出現(xiàn)應(yīng)使用無臭氧紫外線燈或在消毒完30分鐘后再進入超凈工作室操作。