產(chǎn)品名稱：EZ細(xì)胞及動(dòng)物組織RNA直擴(kuò)RT-PCR試劑盒（一步法）

英文名稱：EZ Cell and Tissue RNA Direct PCR Kit（One Step)

產(chǎn)品規(guī)格：30T/100T

產(chǎn)品報(bào)價(jià)：1200元/3000元

試劑盒應(yīng)用：細(xì)胞組織或細(xì)胞基因的擴(kuò)增與克隆、RNA病毒基因的擴(kuò)增、RNA病毒PCR診斷、RNA病毒Real-time PCR.。

試劑盒組成：RNA-EZ-1、RNA-EZ-2、RNA-EZ-3、RNA-EZ-4、RT-Enzyme、2*RT-Buffer、ddH2O

保存條件：-20ºC保存。使用前將RNA-EZ-1、RNA-EZ-4在室溫或37ºC充分溶解。RNA-EZ-3、RNA-EZ-4和RT-Enzyme使用時(shí)需置于冰上。

使用方法：

細(xì)胞中RNA的擴(kuò)增

（1）將6ul RNA-EZ-1與3ul RNA-EZ-2充分融合。

（2）取20ul細(xì)胞懸液（10^5-10^6cells/ml）,加入上述混合液，混勻。

（3）置于37ºC靜置10分鐘。

（4）加入1ul RNA-EZ-3，混勻。

（5）置于37ºC靜置15分鐘。

（6）置于98ºC加熱5分鐘。

（7）加入60ul的RNA-EZ-4，混勻。

（8）取2ul（7）中處理液進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增。

組織塊中RNA的擴(kuò)增

（1）用 H2O 將 RNA-EZ-1 稀釋 5 倍，每 25 μL 的 RNA-EZ-1 稀釋液中加入 3 μL 的 RNA-EZ-2，混合均勻。同時(shí)處理多個(gè)組織塊時(shí)，可以按照以上比例配制預(yù)混液并分裝到每個(gè)離心管 26 µL。

（2）切取半顆米粒大小的組織塊（< 3 mm3），*浸入上述混合液中。

（3）置于 37ºC 靜置 10 分鐘。

（4）加入 1µL RNA-EZ-3，混勻。

（5）置于 37ºC 靜置 15 分鐘。

（6）置于 98ºC 加熱 5 分鐘。

（7）加入 60 μL RNA-EZ-4，混勻。

（8）取 2 μL（7）中處理液進(jìn)行 RT-PCR 擴(kuò)增。

Real-Time PCR

取上述細(xì)胞或組織處理液，加入特異性引物和 TaqMan 探針，可進(jìn)行特異性靶標(biāo) RNA 的定

量檢測(cè)。如需進(jìn)行 SYBR Green Real-time PCR，請(qǐng)選擇 EZ021-01/-02（EZ® Cell and Tissue RNA Direct

PCR Kit（One Step)）。

在 RNase free 的離心管中配制 PCR 反應(yīng)體系

按照以下方法設(shè)定 PCR 反應(yīng)

EZ細(xì)胞及動(dòng)物組織RNA直擴(kuò)RT-PCR試劑盒注意事項(xiàng)

（1）取樣的細(xì)胞量應(yīng)當(dāng)適中，濃度不宜過(guò)高或過(guò)低，處理后溶液應(yīng)當(dāng)以透明為宜。

（2） 樣品處理過(guò)程中應(yīng)當(dāng)防止交叉污染，推薦設(shè)置陰性對(duì)照參與處理過(guò)程，以檢測(cè)環(huán)境的污染。

（3）用本產(chǎn)品擴(kuò)增的 RNA 不宜太長(zhǎng)，1000bp 及以內(nèi)的片段較佳，前期研究中可擴(kuò)增長(zhǎng)達(dá) 1800bp的片段，擴(kuò)增片段越長(zhǎng)效率越低。擴(kuò)增的成功率也與 RNA 的豐度、二級(jí)結(jié)構(gòu)以及引物等有關(guān)。

（4）本產(chǎn)品同樣適用于相應(yīng)的細(xì)胞或組織中 RNA 病毒的 PCR、Real-Time PCR 診斷。

（5）2×RT-Buffer 中加入了染料和相應(yīng)試劑，可直接進(jìn)行電泳，無(wú)需另加 Loading buffer。

（6）處理 96 孔板中的細(xì)胞時(shí)，可按照 ddH2O:RNA-EZ-1:RNA-EZ-2=20:5:3 的比例配制預(yù)混液，使用多道移液器直接加入 96 孔板經(jīng) DPBS 洗滌的細(xì)胞中，實(shí)現(xiàn)高通量操作。

（7）2×RT-Buffer 中的染料不影響 TaqMan 探針的效果。

細(xì)胞中RNA病毒短片段的擴(kuò)增。取不同病毒感染的細(xì)胞20ul，用EZ020試劑盒進(jìn)行直擴(kuò)RT-PCR，均可穩(wěn)定獲得目的產(chǎn)物。

細(xì)胞中RNA病毒短片段的擴(kuò)增。取不同病毒感染的細(xì)胞20ul，用EZ020試劑盒進(jìn)行直擴(kuò)RT-PCR，可擴(kuò)增長(zhǎng)達(dá)1800bp的RNA片段。

 細(xì)胞中不同長(zhǎng)度的RNA片段的擴(kuò)增。取20ul BHK-21細(xì)胞，用EZ020試劑盒進(jìn)行直擴(kuò)RT-PCR，可穩(wěn)定擴(kuò)增各種長(zhǎng)度的RNA片段。

同類型產(chǎn)品對(duì)比。用本產(chǎn)品、N公司以及T公司同類產(chǎn)品擴(kuò)增某動(dòng)脈炎病毒的RNA片段，發(fā)現(xiàn)本產(chǎn)品與同類產(chǎn)品相比具有較高的擴(kuò)增效率。