產(chǎn)品名稱：EZ®小鼠組織DNA直擴PCR試劑盒
英文名稱：EZ Mouse DNA Direct PCR Kit
產(chǎn)品規(guī)格：50T/200T
產(chǎn)品價格：420/1350元
試劑盒應(yīng)用：轉(zhuǎn)基因小鼠、基因缺失小鼠鑒定。
試劑盒組成：MuDNA-EZ-1、MuDNA-EZ-2、MuDNA-EZ-3、2×TaqMix、H2O
保存條件：-20ºC保存。使用前將MuDNA-EZ-1、MuDNA-EZ-3在室溫或37ºC充分溶解。MuDNA-EZ-2、2×TaqMix使用時需置于冰上。
使用方法：
（1）將MuDNA-EZ-1和MuDNA-EZ-2以25：1的比例混合均勻，并分裝每管26µL。
（2）剪取小鼠尾巴1-3毫米，*浸入上述溶液中。
（3）置于50ºC加熱30分鐘。
（4）置于95ºC加熱10分鐘。
（5）加入50µL MuDNA-EZ-3。
（4）取上述處理液進(jìn)行PCR擴增。
推薦的PCR加樣體系
成分 | 總20 μL體系 |
2×TaqMix | 10 μL |
上游引物（10 μM） | 1 μL |
下游引物（10 μM） | 1 μL |
模板DNA | 2 μL |
H2O | 6 μL |
PCR反應(yīng)條件
步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94 oC | 5 min |
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變性 | 94 oC | 30 s |
30-35 |
退火 | 50~72 oC | 30 s | |
延伸 | 72 oC | 1 kb/min | |
終延伸 | 72 oC | 10 min |
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| 4 oC | Hold |
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EZ®小鼠組織DNA直擴PCR試劑盒注意事項
（1）剪取不同小鼠尾巴時，應(yīng)當(dāng)更換剪刀，用過的剪刀經(jīng)過84消毒液浸泡和凈水清洗后再使用。
（2）應(yīng)當(dāng)設(shè)置野生型小鼠的對照。
（3）PCR的退火溫度可根據(jù)引物的預(yù)測Tm值減去5ºC，或者通過梯度PCR摸索較佳退火溫度。
（4）TaqMix中加入了染料和相應(yīng)試劑，PCR后可直接進(jìn)行電泳，無需另加Loading buffer。
A129小鼠（JAX number：010830）的鑒定。取2mm鼠尾，用EZ011試劑盒進(jìn)行直接擴增，A129小鼠出現(xiàn)250bp條帶，而野生小鼠呈現(xiàn)155bp條帶，說明該小鼠為純合的突變子。
SYISL缺失小鼠（PNAS，2018）的鑒定。取2mm鼠尾，用EZ011試劑盒進(jìn)行直接擴增，野生小鼠出現(xiàn)1500bp條帶，SYISL缺失小鼠出現(xiàn)455bp條帶，說明該小鼠為純合的突變子。
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