操作流程
收集基因信息——>設計引物——>PCR ——>回收目的片段——>與載體連接,取得連接產(chǎn)物 ——> 用感受態(tài)細胞做轉化 ——>接菌——>陽性克隆(酶切法或PCR)——>質粒抽提——>質粒測序——>測序結果分析——>克隆信息輸入數(shù)據(jù)庫——>質粒實物保存。

PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl     dNTP mix （2mM）
4 μl     引物1（10pM）
2 μl     引物2（10pM）
2 μl     Taq酶 （2U/μl）
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl      加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
下列相關產(chǎn)品：
雷斯頓埃博拉病毒PCR檢測試劑盒

類鼻疽伯克霍爾德菌(BP)核酸檢測試劑盒

類鼻疽伯克霍爾德菌PCR檢測試劑盒

類天花病毒PCR檢測試劑盒
實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現(xiàn)性定量方法，已得到，廣泛用于基因表達研究、轉基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。
定量PCR方法：
a、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應管中加入已定量的內(nèi)標和引物，內(nèi)標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內(nèi)標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標與靶模板的長度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內(nèi)標為對照定量待檢測模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛等標記引物，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結合，再加入抗di高辛酶標抗體－辣根過氧化物酶結合物，最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內(nèi)標，作出標準曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的。
下列是公司正在銷售的產(chǎn)品：
5α-Androstane-3β,17β-diol  571-20-0  中文名：5α-雄烷二醇  分子式：C19H32O2  度：98.0%      小鼠抗心0脂抗體IgM(ACA-IgM)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

5-O-Ethylcleroindicin D  488138-32-5  中文名：  分子式：C10H16O4  度：%  關鍵詞：  植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠抗心0脂抗體IgG(ACA-IgG)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

5'-O-Dimethoxytrityl-N-benzoyl-desoxycytidine  67219-55-0  中文名：5'-O-(4,4'-二甲氧基三苯基)-N(4)-苯甲酰基-2'-脫氧胞苷  分子式：C37H35N3O7  度：98.0%      小鼠apelin12(AP12)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

5-Hydroxymethylfurfural  67-47-0  中文名：5-羥糠醛  分子式：C6H6O3  度：%  關鍵詞：  抗菌; 山茱萸; 黃精; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠抗小核糖核蛋白/Sm抗體(sNP/Sm)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

5-Hydroxymethyl-2-furoic acid  6338-41-6  中文名：5-羥-2-糠酸  分子式：C6H6O4  度：%  關鍵詞：  抗腫瘤; 對照品; 標準品; 微生物代謝產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠絲酸/蘇酸蛋酸酶(STK)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

10172-89-1  Ac-D-Phe-OH  5g  Flos rosae rugosae玫瑰花染料法PCR鑒定試劑盒 

101759-72-2  Boc-N-Me-Thr-OH  1g  Natrii sulfas染料法PCR鑒定試劑盒 

101759-72-2  Boc-N-Me-Thr-OH  5g  Natrii sulfas染料法PCR鑒定試劑盒 

1017606-66-4  LPA2 antagonist 1  100mg  Radix ophiopogonis麥冬染料法PCR鑒定試劑盒 

1017606-66-4  LPA2 antagonist 1  10mg  Fructus hordei germinatus麥芽染料法PCR鑒定試劑盒
牛乳頭瘤病毒PCR檢測試劑盒25460-87-1  Ac-Glu-NH2  250mg  Herba menthae薄荷LAMP鑒定試劑盒 

64365-27-1  Ac-Arg-NH2  1g  Semen arecae檳榔LAMP鑒定試劑盒 

17263-44-4  Z-Gly-Tyr-NH2  5g  Semen arecae檳榔LAMP鑒定試劑盒 

49706-31-2  Z-His-NHNH2  25g  Herba polygoni avicularis萹蓄LAMP鑒定試劑盒 

135273-01-7  (Fmoc-Cys-OH)2  5g  Herba polygoni avicularis萹蓄LAMP鑒定試劑盒
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。產(chǎn)品僅用于科研實驗
7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。