詳細介紹
下列相關(guān)產(chǎn)品:
放線共生放線桿菌PCR檢測試劑盒
放線菌屬通用PCR檢測試劑盒
非洲分枝桿菌PCR檢測試劑盒
非洲馬瘟病毒PCR檢測試劑盒
操作流程
收集基因信息——>設(shè)計引物——>PCR ——>回收目的片段——>與載體連接,取得連接產(chǎn)物 ——> 用感受態(tài)細胞做轉(zhuǎn)化 ——>接菌——>陽性克隆(酶切法或PCR)——>質(zhì)粒抽提——>質(zhì)粒測序——>測序結(jié)果分析——>克隆信息輸入數(shù)據(jù)庫——>質(zhì)粒實物保存。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 |
禽腎炎病毒通用PCR檢測試劑盒 | Avian Nephritis Virus(ANV)RTPCR | 50T |
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
實時熒光定量PCR:
實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限,實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據(jù)標準曲線獲得定量結(jié)果。因此,實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎(chǔ)之上的:
1)Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,剛剛進入真正的指數(shù)擴增期(對數(shù)期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性,即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系,可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確,重現(xiàn)性定量方法,已得到,廣泛用于基因表達研究、轉(zhuǎn)基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。
定量PCR方法:
a、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為熒光標記)。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,分別測定熒光強度,根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標和引物,內(nèi)標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記,下游引物不標記。在模板擴增的同時,內(nèi)標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標與靶模板的長度不同,二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強度,以內(nèi)標為對照定量待檢測模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛等標記引物,擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結(jié)合,再加入抗di高辛酶標抗體-辣根過氧化物酶結(jié)合物,最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR-ELISA法只是定性實驗,若加入內(nèi)標,作出標準曲線,也可實現(xiàn)定量檢測目的。
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
3.樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。產(chǎn)品僅用于科研實驗
7.每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。
下列是公司正在銷售的產(chǎn)品:
2-Aminophenyl phenyl sulfide 1134-94-7 中文名:2-氨基二苯硫醚 分子式:C12H11NS 度:98.0% 小鼠肌肝elisa試劑盒 小鼠肌肝試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 小鼠肌肝試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進口分裝),產(chǎn)品別名:小鼠肌肝試劑盒、小鼠肌肝eisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個月。
2-Aminonicotinic acid 5345-47-1 中文名:2-氨基 分子式:C6H6N2O2 度:98.0% 小鼠肌鈣蛋白elisa試劑盒 小鼠肌鈣蛋白試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 小鼠肌鈣蛋白試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進口分裝),產(chǎn)品別名:小鼠肌鈣蛋白試劑盒、小鼠肌鈣蛋白eisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個月。
2-Amino-N-(2-chloro-6-methylphenyl) thiazole-5-carboxamide 302964-24-5 中文名: 分子式:C11H10ClN3OS 度:98.0% 關(guān)鍵詞: 小鼠活化蛋白elisa試劑盒 小鼠活化蛋白試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 小鼠活化蛋白試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進口分裝),產(chǎn)品別名:小鼠活化蛋白試劑盒、小鼠活化蛋白eisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個月。
2-Aminoisonicotinic acid 13362-28-2 中文名:2-氨基異 分子式:C6H6N2O2 度:98.0% 小鼠肌肝(Cr)ELISA試劑盒 組裝/原裝
2-Aminofluorene 153-78-6 中文名:2-氨基芴 分子式:C13H11N 度:99.0% 關(guān)鍵詞: 小鼠肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
102185-28-4 4-Aminophenylphosphorylcholine 5mg Rhizoma curcumae莪術(shù)染料法PCR鑒定試劑盒
102185-33-1 5-Bromo-4-chloro-1H-indol-3-yl phosphate . disodium salt 1g Radix angelicae pubescentis獨活染料法PCR鑒定試劑盒
102185-33-1 5-Bromo-4-chloro-1H-indol-3-yl phosphate . disodium salt 250mg Radix angelicae pubescentis獨活染料法PCR鑒定試劑盒
102185-34-2 Boc-D-Pro-OSu 25g Exocarpium benincasae冬瓜皮染料法PCR鑒定試劑盒
102185-34-2 Boc-D-Pro-OSu 5g Exocarpium benincasae冬瓜皮染料法PCR鑒定試劑盒
禽腎炎病毒通用PCR檢測試劑盒110590-65-3 H-Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg-NH2 25mg Rhizoma gastrodiae天麻探針法PCR鑒定試劑盒
#N/A Guanidine Hydrochloride 100g Radix trichosanthis天花粉探針法PCR鑒定試劑盒
#N/A 2,4-Dihydroxybenzaldehyde 500mg Radix trichosanthis天花粉探針法PCR鑒定試劑盒
#N/A Salicyl alcohol 100mg Radix asparagi天冬探針法PCR鑒定試劑盒
#N/A Salicyl alcohol 10mM*1mLinDMSO Radix asparagi天冬探針法PCR鑒定試劑盒