詳細介紹
實驗流程:
1. 實驗前標準品、試劑及樣本的準備;
2. 加樣(標準品及樣本)100µL,37°C孵育1小時;
3. 吸棄,加檢測溶液A100µL,37°C孵育1小時;
4. 洗板3次;
5. 加檢測溶液B100µL,37°C孵育30分鐘;
6. 洗板5次;
7. 加TMB底物90µL,37°C孵育10-20分鐘;
8. 加終止液50µL,立即450nm讀數(shù)。
ELISA Kit檢測試劑盒優(yōu)點多,更加方便我們的科研學(xué)者進行科學(xué)實驗,是科研實驗的好伙伴。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
bFGF-4 ELISA Kit | GOY-E100204 |
樣本實驗前準備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。
(5)培養(yǎng)細胞
檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標本
切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
注意事項:
1.加樣:
①實驗樣本過多時,可分批次操作,以減少實驗時間延長造成的誤差;
②加酶試劑后,用吸水紙吸干孔外試劑;
③作定量試驗時,使用加樣器加注試劑,并經(jīng)常校正其準確性,此外,要做到一份樣本一個移液頭,防止交叉污染。
2.溫育:
①如有兩種溫度,盡量使用較低的溫育溫度、較長反應(yīng)時間的條件;
②用1個小溫度計放置在板孔反應(yīng)液中測量觀察;
③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學(xué)梯度會造成“邊緣效應(yīng)”,因此盡量采用水浴;
3.洗板:
①手工洗板時,拍板時要垂直,避免交叉污染,用力不能過猛,防止抗原抗體復(fù)合物脫離;
②洗板機洗板時應(yīng)經(jīng)常檢查沖洗頭是否通暢,若被雜物堵塞時可用注射器針頭挑出;
③為了洗滌效果好,實驗室可采用機器與人工洗滌相結(jié)合的方法,在機器洗滌后再進行人工洗板1-2次,或適當增加洗板的次數(shù);
4.顯色:
ELISA試劑盒中,如以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物,則提供的底物為A和B兩瓶應(yīng)用液;如以鄰苯二胺(OPD)為底物,則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應(yīng)條件為37℃或室溫反應(yīng)15-30 min。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑,要臨用前30 min配制且必須避光。以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光,但A、B液應(yīng)盡量避免接觸金屬器械。
5.判定:
讀取結(jié)果要在15-30 min內(nèi)完成,定性測定用肉眼判讀試驗結(jié)果時,反應(yīng)板應(yīng)水平距離白色背景10-15 cm;定量測定時用酶標儀讀取結(jié)果,酶標儀不應(yīng)置于陽光或強光照射下,需先預(yù)熱15-30 min再進行測試。
雷諾嗪 質(zhì)量規(guī)格:美國進口 Ranolazine 性L-G培養(yǎng)基基礎(chǔ)/Acid L-G medium Base堿性物質(zhì)處理的結(jié)核桿菌標本250克國產(chǎn)/進口
黃獨素B(標準品) 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品 Diosbulbin B 小鼠腺上皮細胞*培養(yǎng)基SK-CO-1(人結(jié)直腸腺細胞)
花生紅衣 訂購|咨詢 規(guī)格: 2g 化細胞表面趨化因子受體4抗體 LCN10 ELISA Kit 脂質(zhì)運載蛋白10(LCN10)ELISA試劑盒
羥基銨鹽 質(zhì)量規(guī)格:>99% AHES 尖孢鐮刀菌棉花?;?Fusarium oxyporium f. sp. vasinfectum嗜熱球形脲芽胞桿菌 Ureibacillus thermosphaericus
對葉百部堿 訂購|咨詢 規(guī)格: 20mg 吸引素抗體 TTR ELISA Kit 運狀腺素蛋白/前白蛋白(TTR)ELISA試劑盒
心鈉素Ⅲ,大鼠 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR Atriopeptin III (rat) 大鼠淋巴管內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基苜蓿中華根瘤菌
防己諾林堿 訂購|咨詢 規(guī)格: 20mg 化eIF4E結(jié)合蛋白抗體 MAP2K1 ELISA Kit 絲裂原激活蛋白激酶激酶1(MAP2K1)ELISA試劑盒
鈷胺(標準品) 質(zhì)量規(guī)格:HPLC法含量測定 Mecobalamin ECV-304(人臍靜脈內(nèi)皮細胞)HT-29/大腸細胞
芹菜苷;Apiin 訂購|咨詢 規(guī)格: 20mg ELISA Kit for Human Prothymosin alpha大鼠白介素2可溶性受體α鏈(sIL-2Rα/CD25)ELISA試劑盒,英文名:sIL-2Rα/CD25 ELISA Kit
車前子(車前) 英文名稱:Che Qian (Che Qian) 保存:-20℃ 規(guī)格:2g 化細胞核因子抗體
紫杉 訂購|咨詢 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 晚期糖基化終末產(chǎn)物抗體 APRIL ELISA Kit 增殖誘導(dǎo)配體(APRIL)ELISA試劑盒
2,4-二氨基-6-異丙氧基-1,3,5-三嗪(>98.0%(T)) 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(T) 2,4-Diamino-6-isopropoxy-1,3,5-triazine 中慢生華癸根瘤菌 Mesorhizobium huakuii
金鐵鎖 英文名稱:Psammosilene tunicoides 保存:-20℃ 規(guī)格:1g 神經(jīng)肽Y受體4抗體
bFGF-4堿性成纖維細胞生長因子4ELISA KitAPT agar APT瓊脂 1.10453.0500MERCK默克
YM11瓊脂基礎(chǔ) 250(g)
葡萄糖銨培養(yǎng)基 250(g)
疊氮鈉葡萄糖肉湯 250(g)
植物(大豆)蛋白胨 200培養(yǎng)基原材料,含碳水化合物,提供細菌生長氮源
酚紅煌綠瓊脂 250(g)
TTC瓊脂基礎(chǔ) 250(g)
蔗糖胰蛋白胨肉湯 250(g)
D/E中和瓊脂 250(g)
Dnase test agar DNA酶測試瓊脂 1.10449.0501MERCK默克
李斯特菌顯色培養(yǎng)基 1000 mL/瓶
使用方法:
測定法的靈敏度來自作為報告的酶。,酶是一種有機催化劑,很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng),產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象。因此該體系常被稱為酶放大體系。
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。 24μg/ml 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
12μg/ml 4號標準品 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
6μg/ml 3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
3μg/ml 2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
1.5μg/ml 1號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2. 加樣:分別設(shè)空白孔、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。|
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。