詳細(xì)介紹
使用方法:
測定法的靈敏度來自作為報告的酶。*,酶是一種有機(jī)催化劑,很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng),產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象。因此該體系常被稱為酶放大體系。
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。 24μg/ml 5號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
12μg/ml 4號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
6μg/ml 3號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
3μg/ml 2號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1.5μg/ml 1號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。|
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
ELISA Kit檢測試劑盒優(yōu)點(diǎn)多,更加方便我們的科研學(xué)者進(jìn)行科學(xué)實(shí)驗(yàn),是科研實(shí)驗(yàn)的好伙伴。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
GHRP ELISA Kit | GOY-E99512 |
實(shí)驗(yàn)流程:
1. 實(shí)驗(yàn)前標(biāo)準(zhǔn)品、試劑及樣本的準(zhǔn)備;
2. 加樣(標(biāo)準(zhǔn)品及樣本)100µL,37°C孵育1小時;
3. 吸棄,加檢測溶液A100µL,37°C孵育1小時;
4. 洗板3次;
5. 加檢測溶液B100µL,37°C孵育30分鐘;
6. 洗板5次;
7. 加TMB底物90µL,37°C孵育10-20分鐘;
8. 加終止液50µL,立即450nm讀數(shù)。
?
樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
(4)細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
(5)培養(yǎng)細(xì)胞
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
注意事項(xiàng):
1.加樣:
①實(shí)驗(yàn)樣本過多時,可分批次操作,以減少實(shí)驗(yàn)時間延長造成的誤差;
②加酶試劑后,用吸水紙吸干孔外試劑;
③作定量試驗(yàn)時,使用加樣器加注試劑,并經(jīng)常校正其準(zhǔn)確性,此外,要做到一份樣本一個移液頭,防止交叉污染。
2.溫育:
①如有兩種溫度,盡量使用較低的溫育溫度、較長反應(yīng)時間的條件;
②用1個小溫度計放置在板孔反應(yīng)液中測量觀察;
③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學(xué)梯度會造成“邊緣效應(yīng)”,因此盡量采用水?。?/span>
3.洗板:
①手工洗板時,拍板時要垂直,避免交叉污染,用力不能過猛,防止抗原抗體復(fù)合物脫離;
②洗板機(jī)洗板時應(yīng)經(jīng)常檢查沖洗頭是否通暢,若被雜物堵塞時可用注射器針頭挑出;
③為了洗滌效果好,實(shí)驗(yàn)室可采用機(jī)器與人工洗滌相結(jié)合的方法,在機(jī)器洗滌后再進(jìn)行人工洗板1-2次,或適當(dāng)增加洗板的次數(shù);
4.顯色:
ELISA試劑盒中,如以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物,則提供的底物為A和B兩瓶應(yīng)用液;如以鄰苯二胺(OPD)為底物,則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應(yīng)條件為37℃或室溫反應(yīng)15-30 min。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑,要臨用前30 min配制且必須避光。以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光,但A、B液應(yīng)盡量避免接觸金屬器械。
5.判定:
讀取結(jié)果要在15-30 min內(nèi)完成,定性測定用肉眼判讀試驗(yàn)結(jié)果時,反應(yīng)板應(yīng)水平距離白色背景10-15 cm;定量測定時用酶標(biāo)儀讀取結(jié)果,酶標(biāo)儀不應(yīng)置于陽光或強(qiáng)光照射下,需先預(yù)熱15-30 min再進(jìn)行測試。
豚鼠葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
豚鼠成纖維細(xì)胞生長因子受體2(FGFR2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
豚鼠鈣網(wǎng)蛋白(CRT)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
豚鼠淋巴細(xì)胞趨化因子(Lptn/XCL1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
豚鼠降鈣素受體(CTR)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
豚鼠對氧磷酶1(PON1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
豚鼠胱天蛋白酶14(CASP14)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
豚鼠心肌鈣黏蛋白(H-Cadherin)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
豚鼠角化細(xì)胞內(nèi)分泌因子(KAF)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
豚鼠誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶(NOS2/iNOS)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
豚鼠白介素2受體β(IL-2Rβ)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
豚鼠細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶3(ERK3)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
豚鼠補(bǔ)體因子P(CFP)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
豚鼠著絲粒蛋白I(CENPI)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
GHRP生長激素釋放多肽ELISA Kit3,29-二苯甲?;闃侨嗜?CAS 873001-54-8 規(guī)格: 10mg 訂購|咨詢
(-)-丁香樹脂酚-4-O-β-D- CAS 1369 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢
紫草酸 CAS 28831-65-4 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢
重樓皂苷Ⅶ CAS 76296-75-8 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢
橙黃決明素 CAS 67979-25-3 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢
巴蘇木素 CAS 474-07-7 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢
兒茶素 CAS 154-23-4 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢
貝母堿苷 CAS 規(guī)格: 10mg 訂購|咨詢
氧化苦參堿 CAS 16837-52-8 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg/vial 訂購|咨詢
育亨賓 CAS 65-19-0 規(guī)格: HPLC≥98%,20mg/vial 訂購|咨詢
鬼臼素 CAS 518-28-5 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg/vial 訂購|咨詢
3,3',4',7-四羥基黃 CAS 528-48-3 規(guī)格: HPLC≥98%,20mg/vial 訂購|咨詢
(R)-5-乙烯基-2-惡唑啉 CAS 1072-93-1 規(guī)格: HPLC≥98%,20mg/vial 訂購|咨詢
蘆竹堿 CAS 87-52-5 規(guī)格: HPLC≥98%,20mg/vial 訂購|咨詢