實(shí)驗(yàn)流程:
1. 實(shí)驗(yàn)前標(biāo)準(zhǔn)品、試劑及樣本的準(zhǔn)備；
2. 加樣（標(biāo)準(zhǔn)品及樣本）100µL，37°C孵育1小時(shí)；
3. 吸棄，加檢測(cè)溶液A100µL，37°C孵育1小時(shí)；
4. 洗板3次；
5. 加檢測(cè)溶液B100µL，37°C孵育30分鐘；
6. 洗板5次；
7. 加TMB底物90µL，37°C孵育10-20分鐘；
8. 加終止液50µL，立即450nm讀數(shù)。

ELISA Kit檢測(cè)試劑盒優(yōu)點(diǎn)多，更加方便我們的科研學(xué)者進(jìn)行科學(xué)實(shí)驗(yàn)，是科研實(shí)驗(yàn)的好伙伴。

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樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。

（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（3）尿液：
用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。
（5）培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（6）組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。
注意事項(xiàng)：
1.加樣：
①實(shí)驗(yàn)樣本過(guò)多時(shí)，可分批次操作，以減少實(shí)驗(yàn)時(shí)間延長(zhǎng)造成的誤差；
②加酶試劑后，用吸水紙吸干孔外試劑；
③作定量試驗(yàn)時(shí)，使用加樣器加注試劑，并經(jīng)常校正其準(zhǔn)確性，此外，要做到一份樣本一個(gè)移液頭，防止交叉污染。
2.溫育：
①如有兩種溫度，盡量使用較低的溫育溫度、較長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間的條件；
②用1個(gè)小溫度計(jì)放置在板孔反應(yīng)液中測(cè)量觀察；
③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學(xué)梯度會(huì)造成“邊緣效應(yīng)”，因此盡量采用水?。?/span>
3.洗板：
①手工洗板時(shí)，拍板時(shí)要垂直，避免交叉污染，用力不能過(guò)猛，防止抗原抗體復(fù)合物脫離；
②洗板機(jī)洗板時(shí)應(yīng)經(jīng)常檢查沖洗頭是否通暢，若被雜物堵塞時(shí)可用注射器針頭挑出；
③為了洗滌效果好，實(shí)驗(yàn)室可采用機(jī)器與人工洗滌相結(jié)合的方法，在機(jī)器洗滌后再進(jìn)行人工洗板1-2次，或適當(dāng)增加洗板的次數(shù)；
4.顯色：
ELISA試劑盒中，如以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物，則提供的底物為A和B兩瓶應(yīng)用液；如以鄰苯二胺(OPD)為底物，則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應(yīng)條件為37℃或室溫反應(yīng)15-30 min。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑，要臨用前30 min配制且必須避光。以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光，但A、B液應(yīng)盡量避免接觸金屬器械。
5.判定：
讀取結(jié)果要在15-30 min內(nèi)完成，定性測(cè)定用肉眼判讀試驗(yàn)結(jié)果時(shí)，反應(yīng)板應(yīng)水平距離白色背景10-15 cm；定量測(cè)定時(shí)用酶標(biāo)儀讀取結(jié)果，酶標(biāo)儀不應(yīng)置于陽(yáng)光或強(qiáng)光照射下，需先預(yù)熱15-30 min再進(jìn)行測(cè)試。

人基質(zhì)金屬蛋白酶3(MMP-3)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒  Human MMP-3 (Matrix Metalloproteinase 3) ELISA Kit

人基質(zhì)金屬蛋白酶17(MMP-17)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Human MMP-17 (Matrix Metalloproteinase 17) ELISA Kit

人基質(zhì)金屬蛋白酶24(MMP-24)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Human MMP-24 (Matrix Metalloproteinase 24) ELISA Kit

人基質(zhì)金屬蛋白酶8(MMP-8)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Human MMP-8 (Matrix Metalloproteinase 8) ELISA Kit

人基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP-7)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Human MMP-7 (Matrix Metalloproteinase 7) ELISA Kit

人基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Human MMP-9 (Matrix Metalloproteinase 9) ELISA Kit

人彈性蛋白酶2B(ELA2B)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒   Human ELA2B (Elastase 2B) ELISA Kit

人基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Human TIMP-2 (Tissue Inhibitors of Metalloproteinase 2) ELISA Kit

人基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Human TIMP-3 (Tissue Inhibitors of Metalloproteinase 3) ELISA Kit

人基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Human TIMP-4 (Tissue Inhibitors of Metalloproteinase 4) ELISA Kit

人可溶性半乳糖凝集素3結(jié)合蛋白(LGALS3BP)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Human LGALS3BP (Lectin Galactoside Binding, Soluble 3 Binding Protein) ELISA Kit

人基質(zhì)裂解蛋白/基質(zhì)溶素(MAT)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Human MAT (Matrilysin) ELISA Kit

人骨骼肌快肌肌鈣蛋白I(TNNI2)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Human TNNI2 (Troponin I Type 2, Fast Skeletal) ELISA Kit

人血栓烷受體(TP/TXA2R)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Human TP/TXA2R (Thromboxane Receptor) ELISA Kit

Gastrin胃泌素ELISA Kit基苯酞 CAS 551-08-6 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢

對(duì)甲氧基桂酸乙酯 CAS 24393-56-4 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢

長(zhǎng)梗冬青苷 CAS 42719-32-4 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢

穿心蓮內(nèi)酯 CAS 5508-58-7 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢

表小檗堿 CAS 1816598 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢

原兒茶酸 CAS 99-50-3 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢

二氫歐山芹素 CAS 3804-70-4 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢

芝素 CAS 607-80-7 規(guī)格： HPLC≥98%，20mg/vial 訂購(gòu)|咨詢

土貝母皂甙甲 CAS 102040-03-9 規(guī)格： HPLC≥98%，20mg/vial 訂購(gòu)|咨詢

雷公藤內(nèi)酯 CAS 38647-11-9 規(guī)格： HPLC≥98%，20mg/vial 訂購(gòu)|咨詢

香葉木素-7-O-Β-D-葡萄糖苷 CAS 20126-59-4 規(guī)格： HPLC≥98%，20mg/vial 訂購(gòu)|咨詢

五味子甲素 CAS 61281-38-7 規(guī)格： HPLC≥98%，20mg/vial 訂購(gòu)|咨詢

甘草苷 CAS 551-15-5 規(guī)格： HPLC≥98%；20mg/vial 訂購(gòu)|咨詢

苷 CAS 18524-94-2 規(guī)格： HPLC≥98%；20mg/vial 訂購(gòu)|咨詢

使用方法：
測(cè)定法的靈敏度來(lái)自作為報(bào)告的酶。*，酶是一種有機(jī)催化劑，很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng)，產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象。因此該體系常被稱為酶放大體系。
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。   24μg/ml    5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 12μg/ml    4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 6μg/ml     3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 3μg/ml     2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 1.5μg/ml   1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。|
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。