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詳細介紹
產(chǎn)品名稱：NADP-蘋果酸脫氫酶（NADP-MDH）測試盒品牌
規(guī)格 : 50管/48樣、100管/96樣
測試方法:微量法、紫外分光光度法
貨號：YS-01S6325
測定意義
MDH （EC 1.1.1.37）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，線粒體中MDH是TCA循環(huán)的關鍵酶之一，催化蘋果酸形成草酰乙酸；相反，胞漿中MDH催化草酰乙酸形成蘋果酸。草酰乙酸是重要的中間產(chǎn)物， 連接多條重要的代謝途徑。因此，MDH在細胞多種生理活動中扮演著重要的角色，包括線粒體的能量代謝、 蘋果酸-天冬氨酸穿梭系統(tǒng)、活性氧代謝和抗病性等。根據(jù)不同的輔酶特異性，MDH分為NAD-依賴的MDH和NADP-依賴的MDH， NADP-MDH主要存在于真核細胞中。
測定原理：
NADP-MDH催化NADPH還原草酰乙酸生成蘋果酸，導致340nm處光吸收下降。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。
【友情提示】：本產(chǎn)品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測。避免給您帶來不必要的損失，請仔細閱讀購買說明！
樣品制備：
1）. 直接或稀釋使用清亮無色中性液體樣品，體積可達2.000ml。
2）. 過濾混濁溶液。
3）. 除去樣品中的CO 2 。
4 ）. 加氫氧化鉀或氫氧化鈉將酸性樣品的PH值調(diào)至8.0。
5 ）. 調(diào)整酸性淺色樣品的PH值至8.0，孵育約15分鐘。
6 ）. 用空白樣品做對照測定有色樣品（如有必要調(diào)整PH值至8.0）。
7 ）. 用PVPP（ 聚乙烯吡咯烷酮）或聚酰胺處理深色未經(jīng)稀釋或體積更大的樣品。
8 ）. 壓碎、攪勻固體或半固體樣品，用水溶解提取。
9 ）. 用Carrez試劑將含有蛋白質(zhì)的樣品去蛋白。
10）.含脂肪的樣品用熱水提取。
特點:
(1)應用廣泛
由于各種各樣的無機物和有機物在紫外可見區(qū)都有吸收,因此均可借此法加以測定。到目前為止,幾乎化學元素周期表上的所有元素(除少數(shù)放射性元素和惰性元素之外)均可采用此法。
(2)靈敏度高
由于相應學科的發(fā)展,使新的有機顯色劑的合成和研究取得可喜的進展,從而對元素測定的靈敏度大大提高了一步。特別是由于多元絡合物和各種表面活性劑的應用研究,使許多元素的摩爾吸光系數(shù)由原來的幾萬提高到幾十萬。相對于其它痕量分析方法而言,光度法的精密度和準確度一致*是比較高的。不但在實際工作中光度法被廣泛采用,在標準參考物質(zhì)的研制中,它更受重視,很多光度分析法已制定成為標準方法。
(3)選擇性好
目前已有些元素只要利用控制適當?shù)娘@色條件就可直接進行光度法測定,如鈷、鈾、鎳、銅、銀、鐵等元素的測定,已有比較滿意的方法了。
(4)準確度高
對于一般的分光光度法來說,其濃度測量的相對誤差在1-3%范圍內(nèi),如采用示差分光度法測量,則誤差往往可減少到千分之幾。
(5)適用濃度范圍廣
可從常量(1-50%)(尤其是使用示差法)到痕量(10-6-10-8%)(經(jīng)預富集后)。
(6)分析成本低、操作簡便、快速
操作步驟:
實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量，如樣品濃度過高時，應對樣品進行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。為保證實驗結(jié)果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。
2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl（在使用前一小時內(nèi)配制），酶標板加上覆膜, 37℃反應60分鐘。
3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。
4. 每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100μl，酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。
5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。
6. 依序每孔加底物溶液90μl，酶標板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。
7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應，此時藍色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。
Anti-TNF- Alpha /HRP 辣根過氧化物酶標記鼠抗人壞死因子-α單克隆抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
PLGF (Placenta growth factor) 胎盤生長因子(多肽抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
腱糖蛋白-C抗體 anti-Tn-C 0.2ml
5HT1E Receptor 英文名稱： 5-羥色胺受體1E抗體 0.2ml
EMR1 英文名稱： 表皮生長因子樣受體1 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-JunB (Thr102/Thr104) 磷酸化活化蛋白激酶B抗體 規(guī)格 0.2ml
PLGF (Placenta growth factor) 胎盤生長因子(多肽抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
Polycystin 1(Polycystic Kidney Disease 1) 多囊腎蛋白1抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
Anei-ATX 自分泌運動因子抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-AKT1(Thr34) 磷酸化蛋白激酶B抗體 規(guī)格 0.1ml
MMP-2 基質(zhì)金屬蛋白酶-2 濃縮液 0.1ml 進口分裝
Unc5a 英文名稱： 神經(jīng)突起生長誘導因子受體Unc5a抗體 0.2ml
DKK3 英文名稱： 抑癌蛋白DKK3抗體 0.1ml
Anei-ATX 自分泌運動因子抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
SET 英文名稱： SET易位蛋白/髓系白血病相關蛋白抗體 0.1ml
EphA2 英文名稱： 內(nèi)皮細胞受體蛋白酪酸激酶抗體 0.1ml
核糖核蛋白抗原SSA抗體 Anti-SSA/RO 0.1ml
Anti-Phospho-Tie2 (Ser1119) /FITC 熒光素標記磷酸化血管生成素受體2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-MAP3K8/Tpl2 (Thr290) 磷酸化原活化蛋白激酶激酶8抗體 規(guī)格 0.1ml
Kir6.2 peptide ATP敏感性鉀通道亞基kir6.2抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
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