產(chǎn)品名稱:順烏頭酸酶(ACO)活性檢測(cè)試劑盒品牌
規(guī)格 : 50管/48樣、100管/96樣
測(cè)試方法:微量法、紫外分光光度法
貨號(hào):YS-01S6457
測(cè)定意義
順烏頭酸酶(aconitase),三羧酸循環(huán)中的酶,催化檸檬酸轉(zhuǎn)變?yōu)楫悪幟仕?。檸檬酸本身不易氧化,在順烏頭酸酶作用下,通過(guò)脫水與加水反應(yīng),使羥基由β碳原子轉(zhuǎn)移到α碳原子上,生成易于脫氫氧化的異檸檬酸,為進(jìn)一步的氧化脫羧反應(yīng)作準(zhǔn)備。
測(cè)定原理
ACO催化檸檬酸轉(zhuǎn)化成異檸檬酸,異檸檬酸氧化脫羧將NAD+ 還原生成NADH,導(dǎo)致340nm處光吸收上升。
需自備的儀器和用品
紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
【友情提示】:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。避免給您帶來(lái)不必要的損失,請(qǐng)仔細(xì)閱讀購(gòu)買說(shuō)明!
樣品制備:
1). 直接或稀釋使用清亮無(wú)色中性液體樣品,體積可達(dá)2.000ml。
2). 過(guò)濾混濁溶液。
3). 除去樣品中的CO 2 。
4 ). 加氫氧化鉀或氫氧化鈉將酸性樣品的PH值調(diào)至8.0。
5 ). 調(diào)整酸性淺色樣品的PH值至8.0,孵育約15分鐘。
6 ). 用空白樣品做對(duì)照測(cè)定有色樣品(如有必要調(diào)整PH值至8.0)。
7 ). 用PVPP( 聚乙烯吡咯烷酮)或聚酰胺處理深色未經(jīng)稀釋或體積更大的樣品。
8 ). 壓碎、攪勻固體或半固體樣品,用水溶解提取。
9 ). 用Carrez試劑將含有蛋白質(zhì)的樣品去蛋白。
10).含脂肪的樣品用熱水提取。
操作步驟:
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量,如樣品濃度過(guò)高時(shí),應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4. 每孔加檢測(cè)溶液B工作液(同檢測(cè)A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
特點(diǎn):
(1)應(yīng)用廣泛
由于各種各樣的無(wú)機(jī)物和有機(jī)物在紫外可見(jiàn)區(qū)都有吸收,因此均可借此法加以測(cè)定。到目前為止,幾乎化學(xué)元素周期表上的所有元素(除少數(shù)放射性元素和惰性元素之外)均可采用此法。
(2)靈敏度高
由于相應(yīng)學(xué)科的發(fā)展,使新的有機(jī)顯色劑的合成和研究取得可喜的進(jìn)展,從而對(duì)元素測(cè)定的靈敏度大大提高了一步。特別是由于多元絡(luò)合物和各種表面活性劑的應(yīng)用研究,使許多元素的摩爾吸光系數(shù)由原來(lái)的幾萬(wàn)提高到幾十萬(wàn)。相對(duì)于其它痕量分析方法而言,光度法的精密度和準(zhǔn)確度一致*是比較高的。不但在實(shí)際工作中光度法被廣泛采用,在標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)的研制中,它更受重視,很多光度分析法已制定成為標(biāo)準(zhǔn)方法。
(3)選擇性好
目前已有些元素只要利用控制適當(dāng)?shù)娘@色條件就可直接進(jìn)行光度法測(cè)定,如鈷、鈾、鎳、銅、銀、鐵等元素的測(cè)定,已有比較滿意的方法了。
(4)準(zhǔn)確度高
對(duì)于一般的分光光度法來(lái)說(shuō),其濃度測(cè)量的相對(duì)誤差在1-3%范圍內(nèi),如采用示差分光度法測(cè)量,則誤差往往可減少到千分之幾。
(5)適用濃度范圍廣
可從常量(1-50%)(尤其是使用示差法)到痕量(10-6-10-8%)(經(jīng)預(yù)富集后)。
(6)分析成本低、操作簡(jiǎn)便、快速
Anti-HSP-70/HRP 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記熱休克蛋白70抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
human IgM (親和純化)人IgMMulti-class antibodies規(guī)格: 1mg
抗組蛋白抗體 Anti-Histone H3 0.1ml
Rabbit Anti-horse IgG 兔抗馬IgG 1mg
FAM78B 英文名稱: FAM78B蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-RKIP (Ser 153) 磷酸化Raf激酶抑制蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
human IgM (親和純化)人IgMMulti-class antibodies規(guī)格: 1mg
TP53(tumor protein p53; Li-Fraumeni syndrome) 抗P53抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5ml
Anti-Caldesmon 鈣介質(zhì)素抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh PDHB 丙酮酸脫氫酶E1β亞單位抗體 規(guī)格 0.2ml
Bcl-2 濃縮液 0.1ml 進(jìn)口分裝
TrkA 英文名稱: 酪酸激酶A抗體 0.1ml
Phospho-CEBP alpha (Thr222 + Thr226) 英文名稱: 磷酸化轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子CEBP α 抗體 0.1ml
Anti-Caldesmon 鈣介質(zhì)素抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
SOCS1 英文名稱: 細(xì)胞因子信號(hào)傳導(dǎo)抑制蛋白1抗體 0.1ml
Epac1 英文名稱: 環(huán)磷酸腺苷調(diào)節(jié)鳥(niǎo)嘌呤核苷酸交換因子1抗體 0.2ml
孤菲肽/痛敏肽抗體 Anti-Nociceptin 0.1ml
Anti-Phospho-RIP2 (Ser176) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化受體結(jié)合絲氨酸蘇氨酸激酶2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-p53BP1(Ser25/29) 磷酸化p53結(jié)合蛋白1抗體 規(guī)格 0.1ml
ABCG1 peptide 三磷酸腺苷結(jié)合盒亞家族G1抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
順烏頭酸酶(ACO)活性檢測(cè)試劑盒品牌加拿大香脂續(xù)隨二萜動(dòng)物糖蛋白酶解法*糖基分解試劑盒
正己酸(>98%,BR)千金子二萜動(dòng)物糖蛋白化學(xué)法*糖基分解試劑盒
己內(nèi)酰(>98%,BR)龍腦動(dòng)物糖蛋白酶解法非N非O糖基磷脂酰?。℅PI)分解試劑盒
羧肽酶 Y >50 U /mg5-羥甲基糠動(dòng)物糖蛋白電泳遷移檢測(cè)試劑盒
蓖麻油β-胡蘿卜素動(dòng)物糖蛋白高酸希爾(PAS)法阿爾新藍(lán)(ALCIAN BLUE)染色試劑盒
1,1-環(huán)己基二乙酸百秋李動(dòng)物組織石蠟切片糖蛋白高酸希爾(PAS)法阿爾新藍(lán)(ALCIAN BLUE)染色試劑盒
反式-1,2-環(huán)己二乙酸(>98%,BR)去氫木香內(nèi)酯動(dòng)物組織凍切片糖蛋白高酸希爾(PAS)法阿爾新藍(lán)(ALCIAN BLUE)染色試劑盒
乙酸纖維素木香烴內(nèi)酯動(dòng)物全組織糖蛋白高酸希爾(PAS)法阿爾新藍(lán)(ALCIAN BLUE)染色試劑盒