骨肉瘤細(xì)胞;MG-63公司正在銷售的產(chǎn)品：磷酸化原癌基因c-kit抗體Anti-PSAP/PAP (human) 前列腺酸性磷酸酶抗體(人)
磷酸化原癌基因c-kit抗體Anti-PSCA 前列腺干抗原抗體
胸腺基質(zhì)生成素受體抗體Anti-PSD93 突觸后密度蛋白93抗體
磷酸化非受體酪氨酸酶c-Abl抗體Anti-Phospho-PSD93 (Tyr340) 磷酸化突觸后密度蛋白93

產(chǎn)品名稱：骨肉瘤細(xì)胞;MG-63

規(guī)格：1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
貨號(hào)：YS-02X9666

細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn) ：細(xì)胞生長(zhǎng)良好，形態(tài)正常

儲(chǔ)存條件：2℃-8℃，避光儲(chǔ)存

運(yùn)輸條件：冰袋冷藏運(yùn)輸
公司產(chǎn)品僅用于科研

細(xì)胞特性：

1)】組織來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常眼組織。

2)細(xì)胞鑒定：細(xì)胞免疫熒光染色為陽性。

3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。

5)細(xì)胞生長(zhǎng)方式：上皮樣，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。

 

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備RPMI-1640 培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；Glutamax（invitrogen 35050061），1%；Sodium pyruvate（invitrogen 11360070），1%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)：

（1）凍存前細(xì)胞狀態(tài)，細(xì)胞最好在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，細(xì)胞密度適合，剛剛發(fā)生細(xì)胞融合，過密或連成片的細(xì)胞狀態(tài)不好，而且消化時(shí)不容易分散；

（2）凍存的密度不宜過低，10的6次方-7次方的數(shù)量級(jí)比較好，我凍存的細(xì)胞一般T25培養(yǎng)瓶（5*107），一瓶?jī)鲆还埽?.5ml凍存管），10cm培養(yǎng)皿（大概10的8次方個(gè)細(xì)胞）分成兩管。

（3）消化和吹打，切忌胰酶消化過度，吹打不可太用力，最好不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養(yǎng)基吹打哦，不是加入凍存液再吹打。

（4）離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對(duì)于腫瘤細(xì)胞株而言要求不是很嚴(yán)格，我從10%-90%都用過，問題不大，個(gè)人認(rèn)為10%-20%可以了，能節(jié)約處就節(jié)約點(diǎn)嘛！另外，凍存液可以在處理細(xì)胞前配置，放在4度冰箱預(yù)冷。細(xì)胞離心后直接用預(yù)冷的凍存液重懸，移入凍存管。

（5）關(guān)于“慢凍"，傳統(tǒng)的方法，LLC細(xì)胞凍存管用棉花包好，4度2h，-20度2h或更長(zhǎng)，-80度過夜，最后液氮。對(duì)于條件較好的實(shí)驗(yàn)室和細(xì)胞凍存數(shù)量多的實(shí)驗(yàn)室，推薦使用程序降溫盒，內(nèi)裝異丙醇，在-80度并內(nèi)可以逐漸降溫，很方便，省了包棉花、4度、-20度了。

PMP2 /FITC 熒光素標(biāo)記周圍神經(jīng)髓鞘蛋白2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Goat  Mouse IgG Whole serum 羊抗小鼠IgG抗血清Multi-class antibodies規(guī)格： 1ml

熱休克蛋白90α抗體  HSP-90α 0.1ml

Mouse  rabbit IgG 小鼠抗兔IgG 1mg

FGFR2 英文名稱： 成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體2抗體 0.1ml

Rhesus antibody Rh Phospho-Rb(Ser788) 磷酸化視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤相關(guān)蛋白1抗體 規(guī)格 0.1ml

Goat  Mouse IgG Whole serum 羊抗小鼠IgG抗血清Multi-class antibodies規(guī)格： 1ml

CD40L 人CD40LMulti-class antibodies規(guī)格： 48T

 DEC-205/CD205/Ly75 LY75抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Nephrin 腎小球細(xì)胞粘附分子受體抗體 規(guī)格 0.1ml

Human Glucagon,GC ELISA Kit 人胰高血糖素 96T

TPPP 英文名稱： 微管蛋白聚合促進(jìn)蛋白24 0.2ml

CHRNA2(neuronal) 英文名稱： 型乙酰膽堿受體A2(神經(jīng)型)抗體 0.1ml

 DEC-205/CD205/Ly75 LY75抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

SLC34A2 英文名稱： 磷酸鈉協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體 0.1ml

FOXO1A 英文名稱： 叉頭蛋白O1抗體 0.2ml

一種細(xì)胞應(yīng)激分子抗體  MICA 0.1ml

 RXR Alpha/FITC 熒光素標(biāo)記核受體RXRα抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-PERK(Thr980) 磷酸化蛋白激酶樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶抗體 規(guī)格 0.1ml

bovine Insulin protein 胰島素蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 10mg
骨肉瘤細(xì)胞;MG-63固紅紫色LB鹽右旋糖酐分子量D8（tobacco）*培養(yǎng)基

莧菜紅右旋糖酐分子量D2000擬南芥（arabidopsis）*培養(yǎng)基

麗春紅4R,新胭脂紅,亮麗春紅5R,酸性紅18低分子肝素吊鐘海棠*培養(yǎng)基

酚藏花紅D-葡萄糖酸海石竹*培養(yǎng)基

天狼星玫紅，BBD-鹽酸氨基葡萄糖麝香石竹*培養(yǎng)基

釕紅蚓酶唐菖蒲*培養(yǎng)基

藻紅B,熒光素D-甘露糖月季花*培養(yǎng)基

酸性紅88 甘露聚糖肽康奈馨*培養(yǎng)基

使用步驟：

一）準(zhǔn)確稱量試劑：根據(jù)不同的菌類和用途，選擇適宜的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基所需試劑必須純凈。

（二）校正pH值：將稱量好的培養(yǎng)基各種成分放入容器內(nèi)，標(biāo)記劃線，加熱溶解，補(bǔ)充水分，測(cè)定酸堿度，常用pH6.8～8.0的精密試紙或酸度計(jì)測(cè)定。用1N NaOH和1N HCl調(diào)節(jié)pH值到適宜范圍內(nèi)。

（三）過濾：將玻璃漏斗置鐵架上，再用人子宮成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中，將上述培養(yǎng)基倒入其中過濾至透明。

（四）分裝：將過濾后的培養(yǎng)基分裝于中試管或三角瓶?jī)?nèi)（試管內(nèi)每支裝5mL；三角瓶中裝100～150ml），塞好棉塞用牛皮紙包扎好，準(zhǔn)備滅菌。

（五）滅菌：培養(yǎng)基的滅菌，常用高壓蒸汽滅菌法。一般微生物的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞在水中煮沸后即被殺死，但細(xì)菌的芽胞有較強(qiáng)的抗熱性，須經(jīng)高壓蒸汽滅菌才能達(dá)到*滅菌的目的。根據(jù)蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理，即壓力越大，蒸汽溫度就越高。因此，在同一溫度條件下，采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好。而且在濕熱情況下，菌體吸收水分后，其蛋白質(zhì)易于凝固變性，因?yàn)檎羝拇┩噶?qiáng)，殺菌效果好。