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北京中檢葆泰生物技術(shù)有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第9年

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葡聚糖酶(纖維素酶)檢測底物使用說明書

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更新時(shí)間:2024-11-20 13:28:47瀏覽次數(shù):1258次

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1.原理
該方法用于特異性檢測纖維素酶制劑中的葡聚糖酶(內(nèi)切纖維素酶)。孵育染色的纖維素和纖維素酶,底物通過內(nèi)部作用被解聚產(chǎn)生低分子量的染色片段,之后在反應(yīng)混合物中加入沉降劑,通過離心方法去除大分子量物質(zhì),測定上清液的顏色,參照標(biāo)準(zhǔn)曲線可以確定分析溶液中的內(nèi)切纖維素酶。

2.底物
底物采用的是部分解聚的染色的羧甲基纖維素-4M,用藍(lán)色染料R染色多聚糖,大約1個(gè)染料分子連接20個(gè)糖基。

3.溶解

1.原理

該方法用于特異性檢測纖維素酶制劑中的葡聚糖酶(內(nèi)切纖維素酶)。孵育染色的纖維素和纖維素酶,底物通過內(nèi)部作用被解聚產(chǎn)生低分子量的染色片段,之后在反應(yīng)混合物中加入沉降劑,通過離心方法去除大分子量物質(zhì),測定上清液的顏色,參照標(biāo)準(zhǔn)曲線可以確定分析溶液中的內(nèi)切纖維素酶。

2.底物

底物采用的是部分解聚的染色的羧甲基纖維素-4M,用藍(lán)色染料R染色多聚糖,大約1個(gè)染料分子連接20個(gè)糖基。

3.溶解

2g粉狀底物加入到帶加熱板和磁力攪拌棒攪拌的80mL劇烈沸騰的水中,之后關(guān)閉加熱板,繼續(xù)攪拌直到溶液/漿液勻質(zhì)(大約20分鐘),再加入5mL乙酸鈉緩沖液(2M,pH4.5),冷卻溶液到室溫。調(diào)節(jié)pH4.5,定容到100mL。該溶液可以儲(chǔ)存在4℃下,在此條件下,并且不被內(nèi)切纖維素酶污染時(shí),該溶液可以穩(wěn)定保存至少12個(gè)月。下次使用前,劇烈震蕩儲(chǔ)存瓶子將底物溶液混合。該溶液是粘性的,應(yīng)用容積式移液器移?。ㄈ?span>Eppendorf Multipette® with a 5.0 mL Combitip)。





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