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產(chǎn)品描述

Anti-GFP磁珠是粒徑為200nm的納米磁珠表面上共價結(jié)合了大量的高質(zhì)量的鼠源抗GFP單克隆抗體 納米級磁珠提供的超大比表面積，具有更多的結(jié)合位點，磁珠使用量更少，非特異性吸附率低。本產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于細(xì)胞裂解物、細(xì)胞分泌上清、血清、腹水等樣品中帶有GFP標(biāo)簽融合蛋白的免疫沉淀（IP）或免疫共沉淀（Co-IP）。 由于采用磁性分離，使得每次IP和Co-IP可以節(jié)省40%的時間。

訂購信息

運輸與保存

藍(lán)冰運輸。4℃保存，有效期12個月。注：避免凍融或離心磁珠。

技術(shù)參數(shù)

使用方法

貼壁細(xì)胞樣品：

1. 移去培養(yǎng)基，用PBS洗細(xì)胞兩次。

2. 收集細(xì)胞至1.5 mL EP管內(nèi)，按比例加入IP Lysis/Wash Buffer，同時加入PMSF等相應(yīng)的抑制劑，混勻后置于冰上靜置5-20 min（期間混勻幾次）。

3. 4℃，12000-16000xg，10 min離心收集上清液，置于冰上以備后續(xù)實驗（或置于 -80℃ 長期保存）。

表1.培養(yǎng)皿IP Lysis/Wash Buffer推薦使用體積

懸浮細(xì)胞樣品：

1. 4℃、500-1000xg、10 min，收集細(xì)胞，棄上清。

2. 用PBS 洗細(xì)胞一次，即用 PBS 將細(xì)胞團(tuán)重懸，4℃、500-1000xg、5 min，收集細(xì)胞，棄上清。

3. 用預(yù)冷的IP Lysis/Wash Buffer重懸細(xì)胞。每50 mg 細(xì)胞使用500μL IP Lysis/Wash Buffer。同時加入PMSF等相應(yīng)的抑制劑，混勻后置于冰上靜置5-20 min（期間混勻幾次）。

4. 4℃，12000 -16000xg，10 min離心收集上清液，置于冰上以備后續(xù)實驗（或置于-80℃長期保存）。

血清樣品：

一般建議建議用IP Lysis/Wash Buffer稀釋血清樣品至目標(biāo)蛋白終濃度為50-150µg/mL，置于冰上備用（或置于-20℃長期保存）。

免疫沉淀：

注：為保證磁珠均勻分布，使用前通過反復(fù)顛倒或輕微渦旋混勻瓶中磁珠。

1.   將25-50µL的Anti-GFP免疫磁珠加入1.5 mL離心管中。

2.   向磁珠中加入500 µL預(yù)冷PBS，輕柔混勻。

3.   將離心管放入磁力架中收集磁珠到離心管的一邊，去除上清。

4.   向離心管中加入200-500 µL IP Lysis/Wash Buffer。顛倒離心管數(shù)次或輕微渦旋混勻1 min。用磁力架收集磁珠，去除上清。

5.   將含有GFP標(biāo)記蛋白加入裝有磁珠的離心管中，保持混勻室溫下孵育1-2 h，或4℃ 2-4 h。

6.   用磁力架收集磁珠，除去未結(jié)合的樣品，保存以備分析。

7.   向離心管中加入1000 µL IP Lysis/Wash Buffer，輕柔混勻磁珠5-10min。收集磁珠，棄上清。再重復(fù)洗兩次。

8.   變性洗脫：向離心管中加入80-100 µL SDS-PAGE Sample Loading Buffer（1×），將樣品置于100℃水浴或者金屬浴中加熱10 min。通過磁力架分離磁珠，保留含有目的抗原的上清。注：如需保持蛋白活性，也可采用以下洗脫方式。

低pH洗脫：向離心管中加入100 µL Elution Buffer。保持混勻在室溫下孵育離心管5-10 min。通過磁力分離磁珠，保留含有目的抗原的上清。每100 µL洗出液中加入20 µL Neutralization Buffer來中和低pH。

注意事項

1.   本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。

2.   請勿高速離心、干燥或冷凍磁珠，這些操作會導(dǎo)致磁珠聚集而降低結(jié)合能力。

3.   IP實驗中不同類型的抗體與抗原結(jié)合的親和性是有區(qū)別的，抗體與抗原結(jié)合還會受到IP Lysis/Wash Buffer的影響，因此，如使用本實驗步驟不能獲得最佳的實驗結(jié)果，可自行優(yōu)化操作細(xì)節(jié)或者篩選及配制緩沖液進(jìn)行實驗，推薦使用李記生物相關(guān)試劑，詳見底部。

4.   磁珠使用前應(yīng)充分振蕩均勻。磁珠應(yīng)保存在儲存溶液中，防止干燥。

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本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。