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EZ Cell Transfection Reagent，EZ Trans 細胞轉(zhuǎn)染試劑（高效）

一、產(chǎn)品描述

1.EZ Trans細胞轉(zhuǎn)染試劑作為新一代的轉(zhuǎn)染試劑，其轉(zhuǎn)染原理是帶正電的陽離子聚合物與核酸中帶負電的磷酸基團形成帶正電的復(fù)合物后與細胞表面帶負電的蛋白多糖相互作用，并通過胞吞作用進入細胞。

2.經(jīng)過李記生物的優(yōu)化處理，本產(chǎn)品具有轉(zhuǎn)染效率高，細胞毒性低，操作簡單，重復(fù)性好，適用范圍廣等特點。

　　3.EZ Trans細胞轉(zhuǎn)染試劑與Thermo/ Lipo 2000/Invotrigen/ Lipofectamine 2000等產(chǎn)品相比，操作更便捷，詳見使用方法。

二、訂購信息

三、保存方法

冰袋運輸，4℃保存，保質(zhì)期12個月。不可冷凍！

四、使用方法（以 24 孔板為例，其他培養(yǎng)皿中轉(zhuǎn)染請參考表1）

1. 接種細胞

對于貼壁細胞，轉(zhuǎn)染前18-24 h進行鋪板（不含抗生素），使其在轉(zhuǎn)染時的密度大約在80%左右。對于懸浮細胞，轉(zhuǎn)染當天，配制EZ Trans-DNA復(fù)合物之前進行鋪板，每500 µL生長培養(yǎng)基中加入4~8×10⁵cells。  

【注】：培養(yǎng)液中的血清不影響轉(zhuǎn)染效率。轉(zhuǎn)染試劑使用量受細胞類型及其他實驗條件影響，建議初次使用時設(shè)置梯度進行優(yōu)化合適的使用量。

2. 準備EZ Trans-DNA復(fù)合物

⑴對于每孔細胞，將1 μg質(zhì)粒DNA稀釋到40 μL無血清的高糖DMEM培養(yǎng)基（或者OPTI-MEM Ⅰ 培養(yǎng)基），混勻。

⑵對于每孔細胞，將3 μL EZ Trans轉(zhuǎn)染試劑稀釋到40 μL無血清的高糖DMEM培養(yǎng)基（或者OPTI-MEM Ⅰ 培養(yǎng)基），輕輕混勻。

【注】：無血清的高糖DMEM培養(yǎng)基是稀釋液，不能使用含血清的培養(yǎng)基進行DNA和EZ Trans轉(zhuǎn)染試劑的稀釋。因為EZ Trans-DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物的形成過程不能含有血清。

（3）將稀釋好的EZ Trans轉(zhuǎn)染試劑盡快全部加入到已稀釋好的質(zhì)粒DNA中，輕輕混勻。

【注】：此混合的順序不能反向進行。

（4）室溫放置10-15 min，以形成EZ Trans-DNA復(fù)合物。

3. 轉(zhuǎn)染細胞

（1）將上述80 μL EZ Trans-DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物均勻滴入到含細胞的培養(yǎng)皿中。輕輕晃動培養(yǎng)皿或輕微振蕩，讓EZ Trans-DNA復(fù)合物分散均勻。

（2）在37℃，5% CO₂培養(yǎng)箱培養(yǎng)6-18 h，去除含EZ Trans-DNA復(fù)合物的培養(yǎng)液，更換新的培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)至對轉(zhuǎn)入基因表達分析。

【注】：篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株，轉(zhuǎn)染細胞24 h后，將細胞傳代至新鮮的生長培養(yǎng)基中（將細胞稀釋10倍以上），在37℃，5% CO₂培養(yǎng)箱中孵育24 h，加入篩選培養(yǎng)基。在有轉(zhuǎn)染抗性基因相匹配的藥物篩選條件下，約 1～2周可篩選到耐藥性克隆，在這期間需經(jīng)常更換含篩選藥物的生長培養(yǎng)基。

五、注意事項

1. 質(zhì)粒質(zhì)量：請務(wù)必使用高純度無內(nèi)毒素轉(zhuǎn)染級質(zhì)粒。通過260 nm光吸收測定DNA 濃度，260 nm / 280 nm比值確定 DNA 純度（比值應(yīng)該在1.8～2.0的范圍之內(nèi)）。如有可能，請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒的完整性。

2. 細胞條件：使用適當保存和經(jīng)常傳代的健康細胞。確保細胞沒有被細菌、真菌或支原體污染。如果細胞是近期復(fù)蘇的液氮凍存細胞，請在轉(zhuǎn)染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者李記生物的胎牛血清培養(yǎng)細胞。

3. 細胞培養(yǎng)液要求： EZ Trans細胞轉(zhuǎn)染試劑可用于有血清培養(yǎng)基的轉(zhuǎn)染，并且轉(zhuǎn)染前不需要換培養(yǎng)基。但是，制備轉(zhuǎn)染復(fù)合物時要求用無血清培養(yǎng)基稀釋DNA和轉(zhuǎn)染試劑，因為血清會影響復(fù)合物的形成。確保細胞培養(yǎng)液沒有被細菌、真菌或支原體污染。轉(zhuǎn)染時培養(yǎng)液中不添加抗生素。

4. DNA濃度和EZ Trans細胞轉(zhuǎn)染試劑量的優(yōu)化：DNA濃度和轉(zhuǎn)染試劑使用量受細胞類型及其他實驗條件影響，初次使用應(yīng)優(yōu)化DNA濃度和轉(zhuǎn)染試劑量以得到大的轉(zhuǎn)染效率。使用者可嘗試每 1 μg DNA使用 1～4 μL體積EZ Trans細胞轉(zhuǎn)染試劑進行優(yōu)化。DNA和轉(zhuǎn)染試劑的比例，通常推薦是1:2~1:5。

表1：不同培養(yǎng)體積對應(yīng)的待轉(zhuǎn)DNA、EZ Trans、稀釋液用量

【注】：該表使用量僅供參考，具體使用量還需根據(jù)細胞類型及其他實驗條件進行優(yōu)化。使用時DNA（μg）: EZ Trans細胞轉(zhuǎn)染試劑（μL）比值保持在1:2~1:5。

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