怎么挑選到適合自己試驗的抗體

一、關(guān)于特異性的選擇：特異性的選擇首要需求考慮四個方面：蛋白特異性、種屬特異性、實驗方法特異性、符號物的特異性。
1、ELISA試劑盒蛋白特異性：針對需求檢測的蛋白查找抗體，幾個細(xì)節(jié)要差異，重組表達(dá)的蛋白和內(nèi)源性蛋白的檢測，對抗體的要求是不一樣的，留心查看抗體說明書的檢測說明。如果重組蛋白不是全長表達(dá)，則需求留心抗體的免疫原區(qū)域是否在重組蛋白區(qū)域內(nèi)。內(nèi)源性蛋白能清楚其剪切與修飾的方法，特別表型的蛋白需求進(jìn)行序列比對，并結(jié)合抗體免疫原序列，查看交叉反應(yīng)的情況。磷酸化蛋白檢測需求判定具體位點，不同位點的磷酸化意味著可能有不同的機制存在，不宜相提并論。
2、種屬特異性：同種蛋白不同物種，有著或大或小的差異。現(xiàn)在大部分商品化抗體都是以人源蛋白序列為模板重組蛋白或規(guī)劃多肽抗原的，根據(jù)蛋白的同源性的情況與其他種屬發(fā)作交叉反應(yīng)。需求參照說明書注明的可反應(yīng)種屬信息。一些稀有種屬很難找到抗體，可以通過蛋白的序列比對，選擇同源序列免疫的抗體，不過一般這種情況生產(chǎn)商不會受理其關(guān)于質(zhì)量的申訴，如果可以申請到免費的抗體樣品，則利于抗體選擇。
3、實驗方法特異性：現(xiàn)在運用抗體的實驗方法有許多，不同的運用方法過程中，因為對蛋白樣品的處理方法不一樣，蛋白的含量有差異，對抗體的辨認(rèn)表位和效價要求都是不一樣的。具體的根據(jù)說明書注明的產(chǎn)品應(yīng)用方法進(jìn)行選擇。但是生產(chǎn)商一般不會將每個抗體都進(jìn)行各種實驗的檢測，現(xiàn)在檢測比較多的只是WB、IHC、IF等，如果針對具體的實驗方法沒有找到適宜的抗體的，可以結(jié)合蛋白序列分析和抗體的抗原信息，選擇盡可能有效果的抗體。相同，申請到免費的抗體樣品是個很好的途徑。
4、符號物的特異性一般根據(jù)實驗操作的實驗方法不會運用帶有符號的一抗，比如WB、IHC等，都是通過二抗類的試劑符號抵達(dá)效果呈現(xiàn)的目的。但是根據(jù)儀器分析的一些實驗，可能就會運用到直接符號的一抗，比如流式實驗。那么需求了解到自己行將運用的儀器能檢測到的熒光規(guī)劃，不通的參數(shù)要求選擇對應(yīng)的符號物。在免疫熒光雙標(biāo)實驗中，需求選配不同的熒光物。
二、抗體種屬來歷的選擇：有人認(rèn)為單抗比多抗好，其實這并不是一個謹(jǐn)慎的觀念，只能說在可能性上單抗的特異性更好一些，而多抗的親和力會優(yōu)于單抗，而且特異性并不必定就遜于單抗，首要看抗原的規(guī)劃水平?，F(xiàn)在商品化抗體里單抗首要是鼠單抗、兔單抗，多抗首要是兔多抗、山羊多抗等，其他種屬來歷抗體較少。不建議糾結(jié)于單抗好仍是多抗好，能做出實驗的抗體就是好抗體。在選擇上一般建議實驗種屬和抗體種屬親緣性越遠(yuǎn)越好，不宜同源?？贵w不同種屬會要影響接下來二抗的選配。特別是在免疫熒光雙標(biāo)實驗中，需求在差異于實驗種屬的基礎(chǔ)上，差異開兩個方針的抗體種屬來歷，以便于二抗差異辨認(rèn)。
三、關(guān)于性價比的選擇：抗體的質(zhì)量凹凸畢竟仍是需求通過實驗效果來呈現(xiàn)的，但是在選擇抗體之前我們并無法判別抗體的效果怎么。不管什么品牌的，不管進(jìn)口仍是國產(chǎn)的，都會有用得不錯的產(chǎn)品，也都會有做不出來的產(chǎn)品?？贵w歸于異質(zhì)化產(chǎn)品，不同品牌之間，甚至同一品牌的不同產(chǎn)品之間，抗體質(zhì)量差異都較為顯著，而且沒有共同的衡量規(guī)范。這是抗體選擇中zui難的一個問題。許多人習(xí)慣于根據(jù)實驗室傳統(tǒng)認(rèn)識或參考文獻(xiàn)上運用的產(chǎn)品進(jìn)行選擇，但是因為不同批次間的抗體效果也是有差異的，所以并不能*確保正確選擇。在這種情況下，抗體的售后就尤為重要，遇到抗體質(zhì)量阻礙時，可以確保有效地解決問題，不至于影響實驗的開展?，F(xiàn)在有部分品牌可以供應(yīng)免費的抗體小樣的，無疑對這個問題是一個很好的解決方案。先判定抗體是否適宜自己的實驗，可以避免因為抗體質(zhì)量投訴耽誤實驗安排。在價格方面，需求謹(jǐn)記，zui貴的不必定就是的，zui適宜你的實驗的才是的。花許多錢買到很貴的抗體，再花上很長的時刻去投訴的情況并不稀有。只買對的，不買貴的。在選擇價格的時分還要留心規(guī)范巨細(xì)、抗體濃度、效價規(guī)劃等，要歸納考慮。在規(guī)范方面，根據(jù)畢竟可以稀釋成的作業(yè)液的量的來衡量更為。許多老品牌供應(yīng)的抗體產(chǎn)品根本都是以大包裝為主，就單個課題的實驗而言，過大的包裝有時會形成很大的?，F(xiàn)在Proteintech、Bioworld、CellSignal等品牌都相繼推出小包裝的抗體，這在必定程度上給選擇者更大的選擇自由度，可以根據(jù)運用產(chǎn)品的效價，計算出自己實踐需求的抗體量，做到精判定量采購。
四、關(guān)于品牌的選擇：因為抗體質(zhì)量的異質(zhì)化，關(guān)于抗體的品牌選擇就被我們所重視，但是不管是什么品牌都難免會遇到不適宜自己實驗的抗體。所以一般建議考慮那些業(yè)界廣泛認(rèn)可、購買便當(dāng)、專業(yè)、售后處理方便的品牌。一些甚至都沒有正式署理的，只能備選。一同購買時必定要找可以供應(yīng)產(chǎn)品教導(dǎo)、實驗分析、售后處理的正規(guī)署理商購買，避免因為買到假貨水貨影響實驗。
五、ELISA試劑盒關(guān)于其他一些小細(xì)節(jié)：抗體選擇與運用過程中，多少還會遇到一些意想不到的作業(yè)。有些細(xì)節(jié)，仍是需求多留心一些。如在選擇做阻斷或中和實驗時，有時需求將抗體加到細(xì)胞培養(yǎng)液中，這是需求留心抗體是否含有疊氮鈉。如果是大包裝的抗體，進(jìn)行分裝是比較節(jié)省的方法，如果是價的，可以配成母液再分裝?？贵w的短時刻運送，用一般冰塊堅持溫度是可以滿足要求的。其他不要糾結(jié)于WB過程中分子量的問題。許多時分，我們看到相同的抗體，不同的品牌，甚至同一品牌不同的貨號，標(biāo)示的分子量都不一樣。其實可能只是生產(chǎn)商只檢測時運用了不同的種屬不同的樣品類型，或是參照了不同的文獻(xiàn)，對運用者來說，相同的樣品，不管運用哪個品牌的，只需抗體是對的，目的條帶只會呈現(xiàn)在相同的方位。關(guān)于分子量的問題，一般不建議看產(chǎn)品說明，WB中條帶的方位由樣品決議，并不會因為抗體不同而不同。所以在檢測蛋白之前，我們可以通過數(shù)據(jù)庫或參考文獻(xiàn)，對行將檢測的蛋白做個比較全面的了解，包括其可能剪切與修飾的情況、表型的情況等。在*次運用一個新的抗體時，不要根據(jù)分子量橫向剪膜，可以保存幾個全泳道，看看條帶方位或分布的情況。