小鼠血管生成素2(Ang-2)檢測(cè)試劑盒

本試劑盒采用夾心法酶聯(lián)免疫吸附法，用于體外定量分析小鼠血清、血漿、細(xì)胞裂解液或細(xì)胞培養(yǎng)上清中Angiopoietin-2的含量。預(yù)先包被的抗體為Angiopoietin-2多克隆抗體。檢測(cè)相抗體也為Angiopoietin-2多克隆抗體，經(jīng)生物素標(biāo)記。樣品和生物素標(biāo)記抗體先后加入酶標(biāo)板孔反應(yīng)后，PBS或TBS洗滌。隨后加入過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親和素反應(yīng)；經(jīng)過(guò)PBS或TBS的*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的Angiopoietin-2呈正相關(guān)。

血管生成素（Angiopoietin,Ang）是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一個(gè)與血管新生密切相關(guān)的家族，Ang 有四個(gè)家族成員，即 Ang-1、Ang-2 、Ang-3、 Ang-4。 Ang 各成員蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)基本相同，都是由 3 部分組成：疏水性分泌信號(hào)肽、N-端富α-螺旋的卷曲結(jié)構(gòu)域、C-纖維蛋白原樣結(jié)構(gòu)域。

檢測(cè)指標(biāo)：Angiopoietin-2；ANG-2；ANG2；Angpt2
檢測(cè)范圍：156pg/ml～10000pg/ml
特異性：系統(tǒng)和其它細(xì)胞因子無(wú)交叉反應(yīng)
敏感性：＜10pg/ml

產(chǎn)品組成：

儲(chǔ)存條件：2-8℃（頻繁使用時(shí)），-20℃（長(zhǎng)時(shí)間不用時(shí)）
有效期：6個(gè)月(4℃)；12個(gè)月（-20℃）

參考標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)：(取自某一批次質(zhì)檢數(shù)據(jù)，僅供參考，用戶需要自己建立標(biāo)準(zhǔn)曲線)

小鼠血管生成素2(Ang-2)檢測(cè)試劑盒原理:

問(wèn)：請(qǐng)問(wèn)標(biāo)曲是每次都要做嗎？

答：是的，每次實(shí)驗(yàn)，孵育時(shí)間，洗板次數(shù)等等條件均不一樣，不同實(shí)驗(yàn)的標(biāo)曲不能混用，做一次實(shí)驗(yàn)需要做一次標(biāo)準(zhǔn)曲線，并且用當(dāng)次，同一塊板上的標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果去計(jì)算板內(nèi)樣品的濃度，才能得到準(zhǔn)確的結(jié)果。

問(wèn)：做預(yù)實(shí)驗(yàn)時(shí)每種要做幾個(gè)復(fù)孔呀？

答：預(yù)實(shí)驗(yàn)視情況而定，如果整個(gè)板子孔數(shù)較為充足，建議兩個(gè)復(fù)孔，如不充足，單孔也可以。要盡量保證實(shí)驗(yàn)過(guò)程中加樣準(zhǔn)確。

問(wèn)：血清樣本少量溶血，顏色稍深，對(duì)結(jié)有影響嗎？

答：會(huì)有影響，建議取樣時(shí)需注意，避免溶血、脂血等樣本。如樣本條件受限，建議用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋，減少基質(zhì)效應(yīng)影響。

問(wèn)：試劑盒有推薦稀釋濃度還需要自己測(cè)嗎？

答：試劑盒一般會(huì)給出不同樣品的推薦稀釋比例，但是為大致范圍，還是根據(jù)自己的樣本情況，設(shè)計(jì)預(yù)實(shí)驗(yàn)測(cè)量計(jì)算。

問(wèn)：加完終止液之后測(cè)的幾次數(shù)據(jù)差別也蠻大？

答：加完終止液后，顯色反應(yīng)也不是永遠(yuǎn)停止，形成的黃色顏色會(huì)隨著時(shí)間延長(zhǎng)繼續(xù)加深，建議在15 min內(nèi)讀數(shù)。

問(wèn)：副孔差別比較大，是沒(méi)洗干凈嗎？

答：復(fù)孔值差異較大，主要原因應(yīng)考慮加樣是否準(zhǔn)確，洗板過(guò)程中是否有殘留以及是否有交叉污染。

問(wèn)：配好的抗體沒(méi)用完如何保存，可保存多久？預(yù)實(shí)驗(yàn)用了一個(gè)試劑盒里面的部分板子和試劑，剩下的板子和試劑還能繼續(xù)用于正式實(shí)驗(yàn)嗎？

答：一般來(lái)講，配好的母液，可以在四度保存，多一個(gè)月左右。剩下的板子和試劑是可以繼續(xù)用于正式實(shí)驗(yàn)的，間隔時(shí)間不要太長(zhǎng)，一個(gè)月之內(nèi)均可，需注意試劑避免污染，板子保持干燥。

問(wèn)：后顯示的OD值在多少之間屬于可用值，有要求嗎？

答：有的，建議標(biāo)準(zhǔn)曲線高濃度點(diǎn)的OD值在2.0左右較好，也可參考說(shuō)明書(shū)標(biāo)曲的數(shù)據(jù)。

問(wèn)：樣本總是在標(biāo)準(zhǔn)曲線之外，稀釋100倍也是，怎么辦？

答：在設(shè)置稀釋倍數(shù)之前，需要參考相關(guān)文獻(xiàn)，對(duì)于一些表達(dá)*的蛋白，確實(shí)會(huì)出現(xiàn)這種情況，建議繼續(xù)提高稀釋比例。

問(wèn)：試劑盒推薦用450和540nm雙波長(zhǎng)檢測(cè)，但條件有限可否換成450和620的雙波長(zhǎng)？如何使用校準(zhǔn)波長(zhǎng)？還有，用空白孔校準(zhǔn)可以么？

答：可以的，TMB底物顯色后，吸光峰值在450nm，另外的校準(zhǔn)波長(zhǎng)是防止氣泡等雜質(zhì)造成的干擾設(shè)置，避開(kāi)450左右50nm以上即可。兩次讀取的OD值，用OD450 - OD校準(zhǔn)波長(zhǎng)即可。盡量還是建議有條件的選用雙波長(zhǎng)校準(zhǔn)的方法，因?yàn)楸苊饬瞬煌椎淖x數(shù)影響，防止出現(xiàn)空白孔污染，導(dǎo)致讀數(shù)較高，無(wú)法校準(zhǔn)的情況。

問(wèn)：ELISA可以檢測(cè)胞內(nèi)蛋白么？

答：可以的，選用支持組織勻漿的ELISA試劑盒即可，將組織樣品或細(xì)胞樣品進(jìn)行裂解，提取胞內(nèi)蛋白后進(jìn)行蛋白定量，保證每孔上樣總蛋白量一致即可。

問(wèn)：ELISA試劑盒顯色液是雙組份的，有些其他品牌的是單組分的，使用單組分的有影響么？

答：HRP酶標(biāo)二抗的ELISA試劑盒，顯色底物一般為T(mén)MB，TMB不穩(wěn)定，曝光或污染氧化后會(huì)出現(xiàn)顯色反應(yīng)，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)背景升高，或無(wú)法使用，所以愛(ài)必信的ELISA試劑盒將顯色液調(diào)整為雙組份，方便穩(wěn)定保存，僅在使用前混合，避免了TMB的不穩(wěn)定影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。如您選用的試劑盒為單組分顯色液，在使用前檢測(cè)是否為無(wú)色透明，如果是正常的，對(duì)結(jié)果也沒(méi)有影響，可以放心使用。

問(wèn)：整個(gè)過(guò)程需要避光嗎？避光需要避到什么程度呢？

答：ELISA實(shí)驗(yàn)中，在酶標(biāo)抗體孵育，以及顯色底物孵育這兩步建議避光，其他步驟無(wú)需避光。避光可采用錫紙包裹，或?qū)⒄麄€(gè)ELISA板子放入暗盒或抽屜等無(wú)光處即可。