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簡(jiǎn)介:世界*品牌真核表達(dá)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)原裝,質(zhì)量保證,*。
真核表達(dá)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系。
我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計(jì)經(jīng)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)操作技巧,承諾客戶不成功不收費(fèi)。我們所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)可信,我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒,客戶可以依據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)報(bào)告重復(fù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
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測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程:
具有如下優(yōu)點(diǎn):
(1)shRNA序列數(shù)據(jù)依然來(lái)自國(guó)外成熟shRNA數(shù)據(jù)庫(kù),質(zhì)量有保證。RNA干擾效率的高低主要取決于靶位點(diǎn)的選擇、shRNA序列的設(shè)計(jì),而由于YRBIO所采用的shRNA序列來(lái)自國(guó)外成熟shRNA數(shù)據(jù)庫(kù),算法**,靶位點(diǎn)成功率高,所以shRNA的干擾成功率非常高。
(2)您可以選擇構(gòu)建一條或者多條,靈活度高。
(3)多種啟動(dòng)子,有熒光或無(wú)熒光,綠色熒光或紅色熒光等可自由選擇,以更好地配合后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
(4)載體可作為普通shRNA表達(dá)載體使用,亦可作為腺病毒包裝系統(tǒng)的穿梭載體使用,以進(jìn)行腺病毒包裝。
pEGFP-N1載體具有以下幾方面特點(diǎn):
①?gòu)慕Y(jié)構(gòu)上看,該質(zhì)粒具有很強(qiáng)的復(fù)制能力,可以滿足隨宿主細(xì)胞分裂時(shí)跟隨胞質(zhì)遺傳給新生的子細(xì)胞,這(圖)真核細(xì)胞表達(dá)載體
真核細(xì)胞表達(dá)載體
是保證目的基因穩(wěn)定表達(dá)的因素之一;
②含有的功能強(qiáng)大的啟動(dòng)子SV40和PCMV,可以使目的基因在增殖的細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá);
③具有多克隆位點(diǎn),便于目的基因的插入;
④該載體具有neo基因,可以采用G418來(lái)篩選已成功轉(zhuǎn)染了該載體的靶細(xì)胞。
綠色熒光蛋白(Green Fluorescent Protein,GFP)基因來(lái)源于Jellyfish Aequorea Victoria, 是Shimomura等于1962年發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì),由238個(gè)氨基酸組成,分子量約為27Kd。GFPGFP在包括熱、PH和化學(xué)變性劑等苛刻條件下都很穩(wěn)定,用甲醛固定后會(huì)持續(xù)發(fā)出熒光,但在還原環(huán)境下熒光會(huì)很快熄滅。
與以往常用的報(bào)告基因相比,GFP具有以下優(yōu)點(diǎn):
①在熒光顯微鏡下,用波長(zhǎng)約490 nm的紫外線激發(fā)后,即可觀察到綠色熒光,直接、簡(jiǎn)捷、便于檢測(cè);
②無(wú)需任何的作用底物或共作用物,檢測(cè)的靈敏度不受反應(yīng)效率的影響,保證了*的檢出率;
③蛋白本身性質(zhì)穩(wěn)定;
④可在多種異源生物中表達(dá)且無(wú)細(xì)胞毒性;
⑤其基因片段長(zhǎng)度較小(約717 bp),易于構(gòu)建融合蛋白,且融合蛋白仍能保持熒光激發(fā)活性,為研究其他基因表達(dá)產(chǎn)物的分布提供了方便。EGFP是一種優(yōu)化的突變型GFP,使其產(chǎn)生的熒光較普通GFP強(qiáng)35倍,大大增強(qiáng)了其報(bào)告基因的敏感度。EGFP與其他蛋白的融合表達(dá)已有很多成功的例子,而且其N及C端均可融合,并不影響其發(fā)光。
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