人上皮特異性抗原ESA ELISA試劑盒

人上皮特異性抗原ESA ELISA試劑盒標本必須為液體，不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿。每個標本量收集體積＝100ul×檢測種類。

培養(yǎng)基 :"*培養(yǎng)基有售，用我們拜力生物的*培養(yǎng)基，細胞培養(yǎng)更省心！"

供應(yīng)商 :拜力生物

貨期 :7-10天

1.  試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。

2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標本 / 標準品，酶結(jié)合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的 “預孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。

3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進行下步操作，任何時侯都應(yīng)避免酶標板處于干燥狀態(tài);同時應(yīng)嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。

4.   洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標儀讀數(shù)。

5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標準品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。

6.  反應(yīng)時間的控制：加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強從而影響酶標儀光密度讀數(shù)。

7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。

建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準確性。

如標本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數(shù)。

洗板方法

1.  手工洗板方法：吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘，根據(jù)需要，重復此過程數(shù)次。

2.  自動洗板：如果有自動洗板機，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

計算

以標準物的濃度為縱坐標(對數(shù)坐標)，OD值為橫坐標(對數(shù)坐標)，在對數(shù)坐標紙上繪出標準曲線。推薦使用專業(yè)制作曲線軟件進行分析，如curve expert 1.3，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度，再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

◇      液體類標本

標本必須為液體，不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿。每個標本量收集體積＝100ul×檢測種類。

◇      血清：

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

◇      血漿：

應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，加入10％(v/v)抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1% heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

◇      尿液、胸腹水、腦脊液：

用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

◇      細胞培養(yǎng)上清：

檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

【生物分子】 抗生素/抗真菌素 維生素 氨基酸 核苷酸 脂 糖類 白三烯 前列腺素 藥物結(jié)合物 抗氧化劑 藥理活性化合物 類固醇激素結(jié)合物 半抗原反應(yīng) 半抗原載體結(jié)合物 放射性核素 血小板活化素 tRNA 活性染料和化合物 親和素/鏈霉親和素
【蛋白質(zhì)/抗原/多肽】 免疫球蛋白 封閉肽 人蛋白和抗原 小鼠蛋白和抗原 細菌蛋白和抗原 病毒蛋白和抗原 植物蛋白和抗原 其它蛋白和抗原 細胞質(zhì)蛋白 總蛋白 膜蛋白 核蛋白 細胞裂解和提取物 線粒體蛋白 細胞裂解 組織提取 重組細胞因子
【常用生化試劑】EDTA DTT Tris SDS MOPS HEPES 水 分子生物學緩沖液 蛋白生化緩沖液 去垢劑 染色試劑 溶劑 酸堿 化學試劑 其它生化試劑
【PCR/RT-PCR/qPCR】PCR試劑 PCR對照 特異性PCR試劑盒 PCR克隆試劑盒 RNA 載體及構(gòu)建 PCR克隆載體 M13克隆載體 細菌克隆載體 文庫及構(gòu)建 cDNA文庫 基因組文庫 噬菌體展示文庫
【酶】限制性內(nèi)切酶 蛋白酶 核酸酶 激酶 聚合酶 連接酶
【cDNA及合成純化】cDNA全長基因 RNA cDNA合成 cDNA相關(guān)試劑
【核酸/蛋白合成】Oligo純化 核酸合成柱 核酸合成試劑
【克隆與表達】克隆基因 克隆試劑盒 克隆篩選
【表達分析】 Northern印跡分析 分支DNA和mRNA定量
【蛋白分析】 PAGE凝膠制備 蛋白電泳試劑 預制蛋白凝膠
【核酸純化】 DNA凝膠純化 DNA提取純化 PCR產(chǎn)物純化
【RNAi技術(shù)】 siRNA 反義寡核苷酸 RNAi定量 RNAi文庫
【蛋白檢測】 Western印跡 報告基因檢測 蛋白檢測試劑盒
【實驗動物】 轉(zhuǎn)基因動物 小鼠 大鼠 模式動物
【臨床檢測試劑】 生化檢測 遺傳學檢測 血液檢測
【相關(guān)檢驗試劑】 食品安全檢測 藥品安全檢測
【蛋白純化】 蛋白提取 蛋白透析 蛋白定量 蛋白穩(wěn)定
【細胞培養(yǎng)】 血清 血清替代物 細胞培養(yǎng)基 細胞 細胞株 感受態(tài)細胞 新鮮細胞分離
【干細胞】 干細胞/祖細胞 原代細胞 干細胞培養(yǎng)基
【蛋白修飾】 蛋白標記 載體蛋白結(jié)合 其它
【細胞生物學檢測】 細胞凋亡 細胞分離 細胞增殖
【藥物篩選】 熒光素細胞活力/增殖/毒性檢測
【免疫檢測】 放射性免疫檢測 化學發(fā)光免疫檢測

現(xiàn)在一般完整的試劑盒應(yīng)該有一下幾個組成：

（1）已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）；

（2）酶標記的抗原或抗體（結(jié)合物）；

（3）酶的底物；

（4）陰性對照品和陽性對照品（定性測定中），參考標準品和控制血清（定量測定中）；

（5）結(jié)合物及標本的稀釋液；

（6）洗滌液，在板式ELISA中，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水；

（7）酶反應(yīng)終止液，常用的HRP反應(yīng)終止液為硫酸，其濃度按加量及比色液的體積而異，在板式ELISA中一般采用3mol/L。

血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。血漿：應(yīng)根a據(jù)試劑盒的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，加入10％(v/v)抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1% heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。尿液、胸腹水、腦脊液：用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液。

1.基因工程的酶和試劑; PCR酶，DNA連接酶，RNA酶?等

2.生物化學酶

3.人類和模式生物的基因文庫

4.與DNA重組，復制和修復相關(guān)的蛋白質(zhì)及相關(guān)抗體

5.生長因子

6.細菌蛋白質(zhì)毒素和抗體

7. HIV-1重組蛋白和抗體

8.抗體; Trsanscription因子和RNA加工

9.抗體; 癌癥，信號轉(zhuǎn)導

10.抗體; 免疫學

11.抗體; 染色體，細胞分裂和檢查點

12.抗體; 表觀遺傳學和染色質(zhì)

13; 抗體; 蛋白酶體，泛素和SUMO

14.抗體; 分化，胚胎學和干細胞生物學

15.抗體; 生物學

16.抗體; 腦和神經(jīng)科學

17.抗體; 病毒和感染因子

18.抗體; 植物生物學（即將上市）

19.雜項; 細胞系.LeukoCatch（去除和收集白細胞）

20.定制服務(wù)：蛋白質(zhì)結(jié)合單克隆抗體。

計算

以標準物的濃度為縱坐標(對數(shù)坐標)，OD值為橫坐標(對數(shù)坐標)，在對數(shù)坐標紙上繪出標準曲線。推薦使用專業(yè)制作曲線軟件進行分析，如curve expert 1.3，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度，再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

1. 在儲存及孵育過程中避免將試劑暴露在強光中。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發(fā)和污染,試劑避免受到微生物的污染,因為蛋白水解酶的干擾將導致出現(xiàn)錯誤的結(jié)果。
2. 小心吸取試劑并嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。請注意在吸取標本 / 標準品,酶結(jié)合物或底物時,*加樣之間的時間間隔如果太大,將會導致不同的 “預孵育"時間,
從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。而且,洗滌不充分將影響試驗結(jié)果。
3. 試劑盒保存：部分試劑保存于-20℃,部分試劑保存于2-8℃,具體以標簽上的標示為準。
4. 濃洗滌液會有鹽析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶。
5. 剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì),此為正常現(xiàn)象,不會對實驗結(jié)果造成任何影響。
6. 中,英文說明書可能會有不*之處,請以英文說明書為準。
7. 所有的樣品都應(yīng)管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。
實驗方法：
酶聯(lián)免疫法/酶免法（ELISA）凡購買目錄本公司ELISA檢測試劑盒可提供代測服務(wù)。
檢測原理：采用雙抗體夾心ABC-ELISA法
保存：2-8℃
樣品類型（SAMPLE TYPES）：
標本必須為液體，不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。1ml的全血可得到0.5ml的血清
或血漿。每個標本量收集體積＝100ul×檢測種類。取材前須向銷售人員索要說明書。

發(fā)酵/代謝物經(jīng)驗帶來了另一個有益的產(chǎn)品線。這是向體外診斷（IVD）醫(yī)療設(shè)備行業(yè)提供離子載體組分。自然發(fā)酵離子載體，如纈氨霉素，離子霉素，A23187，尼日利亞菌素，無活菌素，恩鐮孢素，丙甲菌素，...用作離子選擇電極（ISE）。

合成地，產(chǎn)生的離子載體如鋰離子載體VIII，CA-1001，莫能菌素甲酯 ......可用作ISE，以及基于離子載體的光學傳感器（IBOS）。這些化合物在快速增長的可穿戴生物傳感器市場中具有很大的前景，并已被證明是不斷增長的市場。

在酶反應(yīng)中，將固定在孔上的夾心復合物與底物溶液一起溫育，然后通過分光光度微量滴定板讀數(shù)器測量。與孔結(jié)合的復合物的酶活性與樣品中FGF-23的量成正比。通過繪制吸光度對比FGF-23標準品的每種濃度來產(chǎn)生標準曲線。從該曲線確定樣品中FGF-23的濃度。

手工洗板方法：吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘，根據(jù)需要，重復此過程數(shù)次。