在細(xì)胞處于動(dòng)態(tài)變化時(shí)，可能會(huì)發(fā)生意料之外或不同的變化，從而影響對(duì)分析的解讀以及實(shí)驗(yàn)的成功。傳統(tǒng)細(xì)胞觀察的方法是每隔一段時(shí)間，將細(xì)胞從培養(yǎng)箱中拿出進(jìn)行觀察和拍攝，這不僅可能影響細(xì)胞生長，也無法連續(xù)。
賽多利斯Incucyte® 實(shí)時(shí)活細(xì)胞分析系統(tǒng)可以幫您解決這個(gè)難題！
可直接在培養(yǎng)箱中進(jìn)行連續(xù)數(shù)天、數(shù)周或數(shù)月的細(xì)胞實(shí)時(shí)成像和細(xì)胞健康、運(yùn)動(dòng)、形態(tài)和功能分析，適用于各種細(xì)胞類型，就問你香不香？
近期，一篇蘇州大學(xué)醫(yī)學(xué)院的抑制劑篩選文章[1]正式發(fā)布，在這篇IF 10分左右的文章里，使用了很多Incucyte® 的數(shù)據(jù)，下面就跟隨陳老濕一起來解讀一下這篇論文。
骨肉瘤是兒童和青少年最常見的原發(fā)性惡性骨腫瘤?；熌退幮詫?dǎo)致骨肉瘤患者對(duì)常規(guī)治療的反應(yīng)不良。新的有效治療靶點(diǎn)和藥物的發(fā)現(xiàn)仍然是骨肉瘤研究的主要焦點(diǎn)。核受體（NRs）已顯示出新的癌癥治療靶點(diǎn)的巨大前景。在本研究中[1]，使用針對(duì)NRs的29種調(diào)節(jié)劑進(jìn)行了體外藥物篩選，Incucyte® 實(shí)時(shí)活細(xì)胞分析系統(tǒng)是本次篩選使用的主力手段。
本文技術(shù)路線如下
IC即Incucyte® 實(shí)驗(yàn)縮寫。實(shí)驗(yàn)中每1-2小時(shí)拍攝一次，通過計(jì)算細(xì)胞的匯合度來繪制生長曲線
實(shí)驗(yàn)解讀
步驟1
在已知的29種NRs調(diào)節(jié)劑對(duì)3種骨肉瘤細(xì)胞系的單濃度（10uM）抑制實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，有5種化合物抑制作用比較強(qiáng)，但其中1種對(duì)正常成骨細(xì)胞有比較強(qiáng)的毒性作用。
Incucyte®部分單濃度抑制實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：RAR激動(dòng)劑CD437，PPAR抑制劑T0070907對(duì)骨肉瘤細(xì)胞系U2OS有著很強(qiáng)的抑制作用
步驟2
發(fā)現(xiàn)4種化合物對(duì)多數(shù)骨肉瘤細(xì)胞系的抑制有著濃度依賴性，且對(duì)敲除了NRs的細(xì)胞系沒有抑制作用，這些化合物是特異性的針對(duì)NRs來起到抑制作用。
Incucyte®實(shí)驗(yàn)：化合物對(duì)細(xì)胞的抑制有著濃度依賴性
Incucyte®實(shí)驗(yàn)：化合物對(duì)敲除了NRs的細(xì)胞系的抑制作用減弱
步驟3
轉(zhuǎn)錄組學(xué)和免疫印跡結(jié)果顯示這些NRs調(diào)節(jié)劑可以通過調(diào)節(jié)PI3K/AKT/mTOR和ERK/mTOR通路來抑制骨肉瘤細(xì)胞的生長。阻斷mTOR激活的DDIT4被鑒定為這些NRs的常見下游靶基因之一。DDIT4敲除顯著減弱了這些NR調(diào)節(jié)劑對(duì)骨肉瘤細(xì)胞生長的抑制作用。
Incucyte®實(shí)驗(yàn)：化合物對(duì)敲除了DDIT4的細(xì)胞系的抑制作用減弱
當(dāng)然，這些抑制劑在小鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中也顯示了抑制作用，提示用這些NRs調(diào)節(jié)劑治療是一種新的針對(duì)骨肉瘤的潛在治療策略。
為什么越來越多的文章使用Incucyte® ？
培養(yǎng)箱內(nèi)可長達(dá)數(shù)周的連續(xù)觀察，最短幾分鐘間隔拍攝；本次實(shí)驗(yàn)拍攝了10天以上，每隔1-2個(gè)小時(shí)讀取一次，大大減少人力操作，并且不像流式需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行預(yù)處理，使得結(jié)果更準(zhǔn)確
6個(gè)板位，分別獨(dú)立設(shè)置檢測(cè)程序，可以兼容各種孔板和培養(yǎng)皿，通量高；這篇文章一次性篩選了29種化合物與4種細(xì)胞系的實(shí)驗(yàn)組
高效簡(jiǎn)便的模塊化軟件設(shè)置和數(shù)據(jù)分析，輸出圖片、視頻、生長曲線等多指標(biāo)多參數(shù)
大于100種優(yōu)化過的活細(xì)胞專用熒光試劑、耗材及詳盡的Protocol，文章數(shù)大于12000篇
拍攝對(duì)象種類多，懸浮細(xì)胞、貼壁細(xì)胞、類器官和腫瘤球都可以拍攝，還有進(jìn)行劃痕遷移和趨化實(shí)驗(yàn)等
下載《活細(xì)胞監(jiān)測(cè)：優(yōu)化高級(jí)細(xì)胞模型的工作流程》，了解如何在細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞操作以及細(xì)胞檢測(cè)等各個(gè)階段進(jìn)行細(xì)胞質(zhì)量控制（QC）。
-參考文獻(xiàn)-
[1] Nuclear receptor modulators inhibit osteosarcoma cell proliferation and tumour growth by regulating the mTOR signaling pathway. Cell Death & Disease volume 14, Article number: 51 (2023)
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