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二抗是能和一抗結(jié)合的抗體,即抗體的抗體。主要用于檢測一抗的存在。一抗特異性結(jié)合抗原的,二抗是特異性結(jié)合一抗。即一抗的Fc段或Fab片段可以充當抗原刺激機體產(chǎn)生抗體。也就是說,一抗主要是IgG類免疫球蛋白,因此二抗就是抗IgG抗體。
一抗二抗都是一種可以特異結(jié)合別的物質(zhì)的基團,而且一抗可以至少結(jié)合兩種其他基團(底物和二抗),如下圖是直標一抗。
一抗是特異性的結(jié)合目標蛋白,一抗需要發(fā)光物質(zhì)或者顯色基團標記才能被檢測出來,否者一抗和蛋白的結(jié)合與否用肉眼是看不出來的。但是一抗往往比較特異每個都標記成本很高,通常會使用標記二抗可以和一抗結(jié)合,并帶有可以被檢測出的標記(如帶熒光、放射性、化學發(fā)光或顯色基團),所以如今的設計一般是二抗帶上可檢測標記,再來檢測一抗,而一抗識別底物。這樣,當一抗結(jié)合到底物上,就可以通過二抗檢測出來。
比如ECL 顯色原理:在 ECL 底物中,含有 H2O2 和魯米諾(及其衍生物),在 HRP(辣根過氧化物酶)的作用下,發(fā)出熒光。
二抗是由一抗種屬(比如兔,小鼠)的某一亞型的免疫球蛋白IgG免疫哺乳動物(一般是免疫山羊、馬、驢、騾和豚鼠及小鼠等動物)產(chǎn)生的抗體,因此二抗只結(jié)合特定的物種特定亞型的一抗。比如,羊抗小鼠(二抗)會特異性結(jié)合小鼠單抗(一抗)而不會結(jié)合兔多抗或大鼠單抗,所以二抗和一抗要匹配上。
實驗方法不同,二抗耦聯(lián)的基團就會不同,通常主要有酶(辣根過氧化酶HRP和堿性磷酸酶AP),熒光基團(FITC、 Rhodamine、PE、Dylight、Alexa Fluor 、cy3等)、生物-素、金顆粒、。一般做WB、 ELISA、 IHC等實驗都是推薦HRP標記的二抗,IHC推薦生物書標記的二抗,做IF、 FC等都是熒光如Alexa Fluor 488、FITC、PE標記的抗體。
a.免疫印記(WB)
b.免疫組化(IHC/ICC)
c.免疫熒光(IHF/ICF)
d.免疫沉淀免疫共沉淀
特殊二抗
標記基團 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 |
HRP | Peroxidase-Conjugated Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) 過氧化物酶標記山羊抗兔IgG(H+L) | 33101ES |
Peroxidase AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG (H+L) 過氧化物酶標記山羊抗小鼠IgG(H+L) | 33201ES | |
Peroxidase-Conjugated Goat Anti-Rat IgG (H+L) 過氧化物酶標記山羊抗大鼠IgG(H+L) | 33301ES | |
Biotin | Biotin-SP AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) 生物-素標記山羊抗兔IgG(H+L) | 33103ES |
Biotin-SP AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG(H+L) 生物-素標記山羊抗小鼠IgG(H+L) | 33203ES | |
Biotin-SP AffiniPure Goat Anti-Rat IgG(H+L) 生物-素標記山羊抗大鼠IgG(H+L) | 33303ES | |
Alexa Fluor® 488 | Alexa Fluor® 488 AffiniPure Goat Anti-Guinea Pig IgG (H+L) Alexa Fluor 488標記山羊抗豚鼠IgG(H+L) | 33406ES |
Alexa Fluor® 488 AffiniPure Rabbit Anti-Mouse IgG (H+L) Alexa Fluor® 488標記兔抗鼠IgG(H+L) | 33906ES | |
Alexa Fluor® 488 AffiniPure Donkey Anti-Sheep IgG (H+L) Alexa Fluor ® 488標記驢抗綿羊IgG(H+L) | 34906ES | |
Alexa Fluor® 594 | Alexa Fluor® 594AffiniPure Goat Anti-Guinea Pig IgG (H+L) Alexa Fluor 594標記山羊抗豚鼠IgG(H+L) | 33412ES |
Alexa Fluor® 594 AffiniPure Rabbit Anti-Sheep IgG (H+L) Alexa Fluor ® 594標記兔抗綿羊IgG(H+L) | 33812ES | |
Alexa Fluor ® 594 AffiniPure Donkey Anti-Sheep IgG (H+L) Alexa Fluor ® 594標記驢抗綿羊IgG(H+L) | 34912ES | |
Alexa Fluor ® 647 | Alexa Fluor ® 647 AffiniPure Goat Anti- Human IgG (H+L) Alexa Fluor® 647標記山羊抗人IgG(H+L) | 33223ES |
Alexa Fluor® 647AffiniPure Rabbit Anti-Mouse IgG (H+L) Alexa Fluor® 647標記兔抗鼠IgG(H+L) | 33913ES | |
Alexa Fluor ® 647 AffiniPure Donkey Anti-Rat IgG (H+L) Alexa Fluor ® 647標記驢抗大鼠IgG(H+L) | 34413ES | |
FITC | FITC-AffiniPure Rabbit Anti-Goat IgG (H+L) FITC標記兔抗山羊IgG(H+L) | 33707ES |
FITC-AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) FITC標記山羊抗兔IgG(H+L) | 33107ES | |
FITC-AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG (H+L) FITC標記山羊抗小鼠IgG(H+L) | 33207ES | |
FITC-AffiniPure Goat Anti-Rat IgG (H+L) FITC標記山羊抗大鼠IgG(H+L) | 33307ES | |
FITC-AffiniPure Rabbit Anti-Sheep IgG (H+L) FITC標記兔抗綿羊IgG(H+L) | 33807ES | |
Cy3 | Cy3-AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) Cy3標記山羊抗兔IgG(H+L) | 33108ES |
Cy3-AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG (H+L) Cy3標記山羊抗小鼠IgG(H+L) | 33208ES | |
Cy3-AffiniPure Goat Anti-Rat IgG (H+L) Cy3標記山羊抗大鼠IgG(H+L) | 33308ES | |
Cy3-AffiniPure Rabbit Anti-Goat IgG (H+L) Cy3標記兔抗山羊IgG(H+L) | 33708ES | |
Cy3-AffiniPure Rabbit Anti-Sheep IgG (H+L) Cy3標記兔抗綿羊IgG(H+L) | 33808ES | |
羅丹明 | Rhodamine(TRITC)AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) 羅丹明標記山羊抗兔IgG(H+L) | 33109ES |
Rhodamine(TRITC)AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG (H+L) 羅丹明標記山羊抗小鼠IgG(H+L) | 33209ES | |
Rhodamine(TRITC)AffiniPure Rabbit Anti-Goat IgG (H+L) 羅丹明標記兔抗山羊IgG(H+L) | 33709ES |
文獻引用
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