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Hieff MutTM 系列試劑盒是基于Hieff CloneTM快速克隆技術(shù)的定點(diǎn)突變系統(tǒng)，目標(biāo)質(zhì)粒擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)DpnI消化、Hieff CloneTM重組環(huán)化后直接進(jìn)行轉(zhuǎn)化即可完成定點(diǎn)突變。本試劑盒由兩個模塊組成：
HieffTM Pfu DNA Polymerase擴(kuò)增模塊：提供zui高保真度的擴(kuò)增，可擴(kuò)增20 kb以內(nèi)的質(zhì)粒；擴(kuò)增以指數(shù)方式進(jìn)行，極大減少了模板使用量，有利于原始甲基化模板的*降解。
Hieff CloneTM快速克隆模塊：可環(huán)化PCR產(chǎn)物。
Hieff MutTM Site-Directed Mutagenesis Kit單點(diǎn)突變試劑盒適用于長度小于20 kb的任何質(zhì)粒擴(kuò)增，可針對單堿基、連續(xù)多堿基、不連續(xù)雙堿基（相距超過50 bp）定點(diǎn)突變。
Hieff MutTM Multi Site-Directed Mutagenesis Ki多點(diǎn)突變試劑盒t可一次性向目標(biāo)質(zhì)粒上3至5個不連續(xù)位點(diǎn)（相距超過50bp）同時引入定點(diǎn)突變。
使用Hieff MutTM Site-Directed Mutagenesis Kit進(jìn)行單堿基（或連續(xù)多堿基）定點(diǎn)突變
使用Hieff MutTM Site-Directed Mutagenesis Kit進(jìn)行不連續(xù)雙堿基定點(diǎn)突變實(shí)驗(yàn)方案 (兩突變位點(diǎn)相距超過50 bp）
使用Hieff MutTM Muti Site-Directed Mutagenesis Kit進(jìn)行不連續(xù)雙堿基定點(diǎn)突變實(shí)驗(yàn)方案 (兩突變位點(diǎn)相距超過50 bp)
訂購信息
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 引物對數(shù) | *（元） |
Hieff MutTM Site-Directed Mutagenesis Kit | 11003ES10 | 10 rxn | 1對 | 720 |
2對 | ||||
Hieff MutTM Multi Site-Directed Mutagenesis Kit | 11004ES10 | 10 rxn | n≤5對 | 1228 |
FAQ
Q1. 請問單點(diǎn)突變/多點(diǎn)突變是否都是每個位點(diǎn)設(shè)計一對引物？是否都包括堿基/氨基酸突變，堿基插入和缺失？堿基插入/缺失的zui大長度是多少?是否可以進(jìn)行連續(xù)氨基酸的突變，氨基酸的數(shù)量限制是多少？
A1：單點(diǎn)突變/多點(diǎn)突變是每個位點(diǎn)設(shè)計一對引物；正反向引物可以包括堿基/氨基酸突變，堿基插入和缺失，也可以將這些堿基/氨基酸突變/堿基插入和缺失放在一條引物上；堿基插入/缺失的zui大長度沒有限制，可為任何長度；可以進(jìn)行連續(xù)氨基酸的突變，無特別數(shù)量限制。
Q2. 引物設(shè)計的原則是什么？有無的引物設(shè)計軟件，若沒有，推薦幾個好用的引物設(shè)計軟件。
A2：引物設(shè)計基本原則是使擴(kuò)增產(chǎn)物末端有同源序列即可。無官設(shè)計軟件，推薦軟件Primer5，Vector NTI。
Q3. 本試劑盒可以進(jìn)行多點(diǎn)突變，能夠同時進(jìn)行幾個位點(diǎn)的突變? 突變效率如何?進(jìn)行單點(diǎn)突變的突變效率是多少？
A3：zui高同時突變6個獨(dú)立位點(diǎn)（每個位點(diǎn)之間相距超過100bp）。突變效率非常高（單次反應(yīng)500多個克隆，陽性率超過95%）
Q4. 該kit不含有感受態(tài)細(xì)胞，推薦的感受態(tài)細(xì)胞是哪些？
A4：*0，DH，XL10。常規(guī)克隆菌都可以。
Q5. 該試劑盒總共的工作時間一般多久？
A5：實(shí)驗(yàn)操作時間3小時左右。
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