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原代細(xì)胞(Primary cells)是指直接從機(jī)體取出的組織或細(xì)胞獲得單個(gè)細(xì)胞并在體外進(jìn)行培養(yǎng)的細(xì)胞。組織主要指:組織器官、外周血及胚胎等,這些細(xì)胞保留了其在生物體內(nèi)的基本生物學(xué)特性和功能。針對不同的組織解離可選用不同的膠原酶、分散酶、彈性蛋白酶和透明質(zhì)酸酶等,選擇較為復(fù)雜,Cebrary®Tissue Digestion Solution組織消化液(10x)能將不同動物組織樣本溫和、快速地消化解離為細(xì)胞懸液或細(xì)胞團(tuán)塊,可用于后續(xù)類器官的構(gòu)建和細(xì)胞分離培養(yǎng)。該組織消化液廣泛適用于多種實(shí)體腫瘤及正常組織標(biāo)本在體外原代培養(yǎng)的消化解離。
應(yīng)用方向
適用于組織消化包括正常動物組織和腫瘤組織等原代培養(yǎng)的消化解離。
產(chǎn)品特點(diǎn)
組分明確:組分明確,無動物源成分;
安全性高:反應(yīng)過程溫和,對細(xì)胞損傷小,細(xì)胞活率高;
批次穩(wěn)定性好:嚴(yán)格生產(chǎn)質(zhì)檢過程保證批次間性能穩(wěn)定;
污染物檢測: 經(jīng)檢測無支原體、細(xì)菌和真菌殘留;
單批產(chǎn)量高:單批產(chǎn)量在10L級別以上;
保質(zhì)期久:10x濃縮原液,保質(zhì)期長達(dá)2年;
兼容性好:可與大部分類型的體組織和腫瘤組織兼容。
組織消化過程
將動物組織(以腫瘤組織為例)樣本放入生物安全柜內(nèi),去除組織表面壞死、纖維化或凝結(jié)xue塊等活性不良組織,用預(yù)冷的含原代抗生素的DPBS清洗數(shù)次;
使用手術(shù)剪刀或組織解離器將組織剪切成1-3mm小塊,將組織碎塊轉(zhuǎn)移至50mL 離心管中,預(yù)冷的含原代抗生素的 DPBS清洗數(shù)次;
棄去DPBS,保留組織沉淀,向離心管中加入適量無血清培養(yǎng)基,加入1/10體積的組織消化液,用封口膜將離心管密封,置于37℃水浴箱或恒溫水浴播床中進(jìn)行組織消化。根據(jù)組織類型不同,消化時(shí)間控制在 30min左右,難消化的組織亦可多次消化;
消化完成后,使用1ml的移液槍或者無菌巴氏滴管吹打懸液20-50次,使細(xì)胞與結(jié)締組織充分分離:加入適量血清或者BSA溶液削弱消化甚至終止消化;
收集上清含細(xì)胞液體,用70μm-100μm 濾網(wǎng)過濾,去除雜質(zhì);
無菌收集濾液后,4℃,800-1200rpm/min,離心5min;棄去上清,保留細(xì)胞沉淀;
DPBS 再次清洗細(xì)胞沉淀后,4℃、800-1200rpm/min,離心5 min;
棄去上清,保留細(xì)胞沉淀用于后續(xù)類器官培養(yǎng)。
注意事項(xiàng):消化酶須在37度左右好,收集后的細(xì)胞4度短暫保存,可依據(jù)組織性質(zhì),適當(dāng)調(diào)整消化液用量比例,一般8%-12%。
消化結(jié)果
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產(chǎn)品類型 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 |
組織消化液 | Cebrary® Tissue Digestion Solution 組織消化液 | 41423ES10/30/60 | 10/30/100 mL |
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