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巨噬細(xì)胞廣泛存在于體內(nèi)各個(gè)器官，包括表皮、角膜以及無(wú)血管的關(guān)節(jié)內(nèi)部等。在對(duì)巨噬細(xì)胞的體內(nèi)生物學(xué)進(jìn)行研究時(shí)，巨噬細(xì)胞耗竭是重要方法之一。氯膦酸鹽脂質(zhì)體是目前最為成熟、便捷且經(jīng)濟(jì)的巨噬細(xì)胞清除工具，能夠有效清除動(dòng)物體內(nèi)多個(gè)組織和部位（如肝臟、脾臟、肺部、血液等）的巨噬細(xì)胞，也是應(yīng)用最為廣泛的巨噬細(xì)胞清除方法。
今天給大家分享使用翌圣Clodronate Liposomes（巨噬細(xì)胞清除劑）的文章及注意事項(xiàng)，助力大家實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行。
小鼠品系：C57BL/6J小鼠；
注射方式：腹腔注射；
取樣部位：外周血；
注射劑量：200 μl /只；
抗體選擇：F4/80。
檢測(cè)方法
巨噬細(xì)胞耗竭模型采用氯膦酸脂質(zhì)體，腹腔注射200μL每只小鼠，在注射后24小時(shí)，通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血巨噬細(xì)胞數(shù)量。
結(jié)果
參考文獻(xiàn)：Xiong X, Chen S, Shen J, et al. Cannabis suppresses antitumor immunity by inhibiting JAK/STAT signaling in T cells through CNR2. Signal Transduct Target Ther. 2022;7(1):99. Published 2022 Apr 6. doi:10.1038/s41392-022-00918-y(IF:18.187)
不同組織和器官的巨噬細(xì)胞標(biāo)志物也會(huì)有差異。一般在做巨噬細(xì)胞清除實(shí)驗(yàn)前，應(yīng)先查找相關(guān)文獻(xiàn)，找出具體清除部位的巨噬細(xì)胞的表面標(biāo)志物，選擇最佳標(biāo)志物進(jìn)行流式實(shí)驗(yàn)。
組織病理學(xué)檢查：通過(guò)對(duì)組織切片進(jìn)行染色，可以直觀地觀察到巨噬細(xì)胞的數(shù)量和分布情況。常用的染色方法有免疫組化、免疫熒光等。
流式細(xì)胞術(shù)：可以對(duì)細(xì)胞懸液進(jìn)行分析，檢測(cè)特定標(biāo)志物的表達(dá)情況，從而確定巨噬細(xì)胞的比例和狀態(tài)。
會(huì)遇到哪些問(wèn)題？
收到Clodronate liposomes（巨噬細(xì)胞清除劑）后該如何保存、操作？
注射Clodronate liposomes（巨噬細(xì)胞清除劑）后動(dòng)物發(fā)生死亡，是什么原因？
①動(dòng)物注射了不均一的脂質(zhì)體懸液。建議在使用之前輕輕搖晃混勻。
②體內(nèi)清除巨噬細(xì)胞后會(huì)增加例如病毒粒子、細(xì)菌或者酵母感染的幾率。相關(guān)文獻(xiàn)中，有喂食小鼠氨芐西林（Ampicillin，1 mg/mL）或多西環(huán)素（200 mg/kg飼料)，僅供參考。
③盡量保證無(wú)菌環(huán)境。
有沒(méi)有參考的試驗(yàn)方案
僅供參考，實(shí)際使用應(yīng)參考相關(guān)文獻(xiàn)
為什么注射Clodronate liposomes（巨噬細(xì)胞清除劑）后，外周血檢測(cè)沒(méi)有效果？
靜脈注射24 h后巨噬細(xì)胞清除率可達(dá)到80%-90%，一般血液中巨噬細(xì)胞在3天后恢復(fù)正常，建議在注射后24h進(jìn)行檢測(cè)。同時(shí)建議搭配免疫組化進(jìn)行分析。
清除效果不好，能不能增加注射體積？
靜脈注射時(shí)需要依據(jù)動(dòng)物的體重，不能超過(guò)0.1ml/10g，但是進(jìn)行腹腔注射可以適當(dāng)?shù)脑黾幼⑸涞捏w積。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 貨號(hào) | 規(guī)格 |
Clodronate Liposomes(From Vrije Universiteit Amsterdam) 體內(nèi)巨噬細(xì)胞清除劑 | 40337ES08 | 5 mL |
40337ES10 | 10 mL | |
Control Liposomes( PBS ) 體內(nèi)巨噬細(xì)胞清除劑空白脂質(zhì)體對(duì)照 | 40338ES08 | 5 mL |
40338ES10 | 10 mL |
