本公司提供人羊膜上皮細胞產(chǎn)品訂購。上海乾思生化試劑網(wǎng)主營ATCC細胞、ATCC細胞株、ATCC細胞系,凍存復蘇細胞皆有,所供細胞成活率高。如果您需要訂購細胞產(chǎn)品,請與我們,我們將在12小時內(nèi)給您回復。
細胞復蘇操作步驟:
1.將冷凍管迅速由液氮轉(zhuǎn)入到37℃水浴中,冷凍管的頂部保持在水面以上以避免任何污染,不定時攪拌加速解凍;
2.當細胞*解凍后,用含70%乙醇的紗布擦拭冷凍管消毒;
3.將解凍后細胞轉(zhuǎn)移到含4℃預平衡培養(yǎng)液的試管中;
4.細胞懸液在4℃下200磄離心10分鐘;
5.棄上清,將細胞重新懸浮在新鮮培養(yǎng)液中;
6.將細胞轉(zhuǎn)移到細胞培養(yǎng)瓶,CO2孵箱中培養(yǎng);
7.是用倒置顯微鏡檢查細胞存活率以及細胞密度,如果細胞密度過高,用培養(yǎng)液稀釋至適宜濃度。
培養(yǎng)條件:
*培養(yǎng)基:DMEM高糖培養(yǎng)基90%;胎牛血清10%。
培養(yǎng)條件:37.0C carbon dioxide(CO2),5%
傳代方法:
收到細胞后,取出培養(yǎng)瓶在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況。 (一)如果細胞未長滿,用75%酒精噴灑整 個瓶消毒后放到超菌 臺內(nèi),嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶,吸出培養(yǎng)液,僅留下 10ml培養(yǎng)液在瓶內(nèi)繼 續(xù)培養(yǎng)。
(二)如果細胞已長滿,即可進行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下:
1. 棄去培養(yǎng)液,用PBS(不含鈣,鎂離子)洗1-2次。
2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中, 倒轉(zhuǎn)放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預熱,然后又 將培養(yǎng)瓶倒轉(zhuǎn)大約30 秒后,在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓分 散,輕敲幾下培養(yǎng) 培養(yǎng)瓶,細胞隨即脫落下來。
3. 加入6-8ml*培養(yǎng)基,吸出,分到新的培養(yǎng)瓶中。1:3~1:6 傳代;2~3天1次。
注意:傳代后一半用我們的培養(yǎng)基,一半用你們的,以免細 胞不適應而造成生長不好。
凍存方法:凍存液:基礎(chǔ)培養(yǎng)基 +5%DMSO+20%FBS
儲存:液氮儲存