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上海寶葉生物科技有限公司
參考價(jià): | 面議 |
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供貨周期 | 一個(gè)月 | 規(guī)格 | 100毫升 |
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貨號(hào) | MB112 |
sydlabs:蛋白酶K溶液(肽酶 K、內(nèi)切蛋白酶 K、內(nèi)肽酶 K、蛋白酶 K、內(nèi)肽酶 K、Tritirachium 堿性蛋白酶、Tritirachium 蛋白絲氨酸蛋白酶)
蛋白酶 K 溶液通常用于蛋白質(zhì)消化、DNA 提取、RNA 純化、直接 PCR 和基因分型。由于它能非常有效地滅活 DNase 和 RNase,因此在核酸制備過(guò)程中添加重組蛋白酶 K,以分離高度天然、未受損的 DNA 或 RNA;它用于直接 PCR 試劑盒,通過(guò)破壞細(xì)胞裂解物(組織或細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞)中的蛋白質(zhì)來(lái)進(jìn)行基因分型,并釋放基因組 DNA。
蛋白酶 K 是一種廣譜絲氨酸蛋白酶,很初從真菌 Engyodontium album 中分離出來(lái)。該蛋白酶因其消化角蛋白的能力而被命名為“蛋白酶 K"。晶體和分子結(jié)構(gòu)研究表明,該酶屬于枯草桿菌蛋白酶家族,其活性位點(diǎn)具有催化三聯(lián)體 (Asp39-His69-Ser224)。蛋白酶 K 酶沒(méi)有明顯的切割特異性,優(yōu)先切割位點(diǎn)是鄰近疏水性氨基酸的肽鍵。
在還原劑(例如 5 mM DTT)存在下,蛋白酶 K 表現(xiàn)出更高的蛋白水解活性。蛋白酶 K 被絲氨酸蛋白酶抑制劑(例如 PMSF、DFP 和 AEBSF)抑制。
蛋白酶 K 在 1% Triton X-100 中具有活性,在 0.5% (w/v) SDS 中全具有活性,可使蛋白質(zhì)底物變性以提高消化率。該酶在 50-200 ug/mL、pH 7.5-8.0、37 °C 時(shí)效果佳,并且通常會(huì)因后續(xù)苯酚提取而變性。孵育時(shí)間從 30 分鐘到 18 小時(shí)不等,蛋白酶 K 可以在長(zhǎng)時(shí)間孵育期間自動(dòng)消化。
重組蛋白酶 K 是天然蛋白酶的突變體,具有更高的比活性和產(chǎn)量以及更寬的 pH 和溫度范圍。大規(guī)模重組酶生產(chǎn)具有批次一致性、純度高和成本效益高等優(yōu)勢(shì)。重組蛋白酶 K 的無(wú) DNA 性質(zhì)使其非常適合分離 PCR 和 RT-PCR 模板。
MB112:蛋白酶 K 溶液,PCR 的(20 毫克/毫升)
重組蛋白酶K來(lái)自酵母細(xì)胞,克隆了編碼Engyodontium album(Tritirachium album)內(nèi)溶蛋白酶的基因。
CAS 號(hào):39450-01-6。
EC:3.4.21.64。
分子量:29.3 kDa。
等電點(diǎn):8.9。
pH范圍:4.5-12.0;在pH 7.5-11.5范圍內(nèi)具有高活性。
單位定義: 1 個(gè)單位的蛋白酶 K 定義為在 37°C、pH 7.5 下每分鐘從酪蛋白產(chǎn)生 1 umol 酪氨酸的酶活性。
比活性:≥ 780 單位/ml 蛋白質(zhì)。
溫度曲線:建議溫度范圍 37-70°C; 70°C 時(shí)具有很大活性。
消光系數(shù):E 1%= 14.2; 280 nm,10 mM NaCl 和 5 mM CaCl2,pH 8.0。
純度:對(duì)每批 PCR 的重組蛋白酶 K 溶液進(jìn)行測(cè)試,確保不含 RNase、DNase 和 DNA。在 40 µg 蛋白酶 K 與 2 ug RNA 在 37°C 下孵育 2 小時(shí)的質(zhì)量控制程序中未檢測(cè)到 RNase。在 40 µg 蛋白酶 K 與 1 ug λ DNA 在 37°C 下孵育 6 小時(shí)的質(zhì)量控制程序中未檢測(cè)到 DNase。該制劑被認(rèn)為不含 RNase 和 DNase。
配方:0.2 μM 過(guò)濾溶液。
濃度:20毫克/毫升。
溶液配制:PCR 的蛋白酶 K 溶液 (20 mg/ml) 使用 0.22 µm 過(guò)濾器進(jìn)行滅菌,并提供在 50% 滅菌甘油中,以等分試樣在 24°C 至 -80°C 的寬溫度范圍內(nèi)儲(chǔ)存。推薦的蛋白酶 K 稀釋緩沖液:20 mM Tris-HCl (pH 7.4)、1 mM CaCl2;或 20 mM Tris-HCl (pH 7.4)、1 mM CaCl2 和 2% 甘油。
活化劑:1-5 mM Ca 2+。為了刺激蛋白酶 K 活性,可以添加1-5 mM Ca 2+ 。使用激活劑進(jìn)行優(yōu)化可以顯著提高蛋白酶活性。添加EDTA除去鈣后,酶活性會(huì)降低25%。如果 EDTA-Ca 2+酶活性會(huì)降低 80%通過(guò)凝膠過(guò)濾從酶溶液中除去復(fù)合物,同時(shí)可以通過(guò)添加過(guò)量的Ca 2+來(lái)部分恢復(fù)復(fù)合物。
抑制劑:DIFP 或 PMSF。蛋白酶 K 被 DIFP 或 PMSF 滅活(PMSF 很終濃度為 5 mM)。然而,它不受 EDTA、碘乙酸、胰蛋白酶特異性抑制劑 TLCK、胰凝乳蛋白酶特異性抑制劑 TPCK 和對(duì)氯汞苯甲酸鹽的抑制。
運(yùn)輸:PCR 的重組蛋白酶 K 溶液 (20 mg/ml) 用冰袋運(yùn)輸。收到后,立即將其存放在下面建議的溫度下。
穩(wěn)定性和儲(chǔ)存:
使用手動(dòng)除霜冰箱并避免重復(fù)凍融循環(huán)。
自收到之日起超過(guò) 2 年,在 –20°C 下保存。
自收到之日起>1 年,在 2–8°C 下保存。
sydlabs:蛋白酶K溶液