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上海寶葉生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員·5年
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蛋白轉(zhuǎn)染是一種將外源蛋白導(dǎo)入細(xì)胞的技術(shù),廣泛應(yīng)用于基因功能研究、藥物開發(fā)和基因治療等領(lǐng)域。為了確保蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)染的效率和安全性。一、質(zhì)粒DNA的提取與純化1.避免內(nèi)毒素污染:在提取過程中,要特別注意去除內(nèi)毒素,因?yàn)閮?nèi)毒素會(huì)影響細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)染效率??梢允褂脽o內(nèi)毒素的質(zhì)粒提取試劑盒。2.定期檢測(cè)質(zhì)粒質(zhì)量:通過凝膠電泳或光譜光度計(jì)定期檢測(cè)質(zhì)粒的純度和濃度,確保其滿足轉(zhuǎn)染要求。二、細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)化1.選擇合適的細(xì)胞系:根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇合適的細(xì)胞系,常用于瞬時(shí)轉(zhuǎn)染,而Hela細(xì)胞則適合穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。2.控制細(xì)胞生
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深入研究像Vero這樣的細(xì)胞系會(huì)引發(fā)幾個(gè)問題:Vero細(xì)胞到底是什么?Vero細(xì)胞系是如何建立的?“Vero”這個(gè)名字背后有什么故事?本部分旨在闡明Vero細(xì)胞的起源和主要屬性。Vero細(xì)胞系的建立可以追溯到1962年,起源于非洲綠猴的腎上皮細(xì)胞。這個(gè)品系是由日本千葉大學(xué)的Y.Kawakita和Yasumura培育的。“Vero”一詞源自世界語中的“Verdareno”,翻譯成“綠色腎臟”,盡管“Vero”也與“真理”的概念產(chǎn)生了共鳴。Vero細(xì)胞通常形成單層,但可以適應(yīng)懸浮培養(yǎng),顯示出上皮樣結(jié)
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什么是瓊脂糖珠?瓊脂糖珠是具有不同粒徑和濃度的水凝膠。瓊脂糖由瓊脂二糖的重復(fù)單元組成。瓊脂糖珠通常是交聯(lián)和多孔的,因此蛋白質(zhì)可以流過珠子。這些珠子可用于尺寸排阻或親和層析。對(duì)于親和層析,配體(如NTA或IDA)共價(jià)連接到瓊脂糖珠聚合物上,因此標(biāo)記的蛋白質(zhì)可以與其他蛋白質(zhì)分離。幾十年來,瓊脂糖基質(zhì)一直用于蛋白質(zhì)純化,并且各種基于瓊脂糖的基質(zhì)是可商購的。不同基質(zhì)之間的物理性質(zhì)差異很大。德國(guó)CubeBiotech是一家專注于蛋白相關(guān)產(chǎn)品的生產(chǎn)商和服務(wù)商,尤其擅長(zhǎng)于蛋白純化及膜蛋白純化。CubeBiot
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使用 dsGreen 對(duì)凝膠進(jìn)行 DNA 染色
dsGreen是一種特異性結(jié)合雙鏈DNA的熒光染料。染色方案有三種變體:凝膠浸泡、凝膠預(yù)染色和樣品預(yù)染色。凝膠浸泡瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠的經(jīng)典方法。在瓊脂糖或聚丙烯酰胺凝膠中運(yùn)行樣品。在燒杯中,將10µL10,000×dsGreenDMSO溶液添加至100mL1×TE、TBE或TAE緩沖液(對(duì)于小型凝膠),或?qū)?0µL10,000×dsGreenDMSO溶液添加至500mL1×TE、TBE或TAE緩沖液(用于中型凝膠)。用抹刀、棒或磁力攪拌器充分混合。將稀釋的dsGreen溶液倒入適當(dāng)?shù)耐斜P或平 -
在某些情況下,蛋白質(zhì)染色的影響可能會(huì)干擾后續(xù)分析。例如,當(dāng)需要酶活性時(shí),考馬斯染色;或者當(dāng)氨基酸的共價(jià)修飾會(huì)產(chǎn)生虛假結(jié)果時(shí),在氨基酸分析之前進(jìn)行銀染色。在這些情況下,通常使用“導(dǎo)向帶”。引導(dǎo)條是與待分析泳道平行的泳道,包含尺寸標(biāo)記或重復(fù)樣品。凝膠運(yùn)行后,將導(dǎo)帶剪下并染色,然后與凝膠重新對(duì)齊并用作模板來引導(dǎo)條帶切除。該技術(shù)很簡(jiǎn)單。常見的錯(cuò)誤是染色后未能用電泳緩沖液重新平衡凝膠。由于許多污漬會(huì)導(dǎo)致凝膠收縮或膨脹,重新平衡對(duì)于準(zhǔn)確和一致的重新調(diào)整是必要的。在引導(dǎo)帶技術(shù)中,平行泳道被切除并染色以引導(dǎo)帶切
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圖1.DNA大小選擇工作流程?;旌希簩agVigen™納米顆粒與DNA/RNA樣品混合。結(jié)合:與樣品混合時(shí),MagVigen™納米顆粒會(huì)結(jié)合所需的DNA/RNA大小片段。這種相互作用依賴于DNA/RNA分子和納米粒子表面之間的多種因素,例如電荷-電荷相互作用、親水/疏水相互作用、范德華力和其他分子間力。NVIGEN對(duì)磁珠的表面化學(xué)和緩沖環(huán)境進(jìn)行了設(shè)計(jì),為所需的DNA大小片段選擇提供理想的相互作用。清洗:珠子響應(yīng)磁力(通過使用磁鐵,例如磁力分離架),使結(jié)合的材料能夠快速有效地與樣品的其余部分分離
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膜蛋白質(zhì)組和分泌蛋白組被認(rèn)為是很大和很重要的蛋白質(zhì)類別之一。膜蛋白被定義為與細(xì)胞膜或細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞器相關(guān)或附著的蛋白質(zhì)。它們分為外周蛋白和整合蛋白。外周膜蛋白暫時(shí)與脂質(zhì)雙層相關(guān),但不全跨越膜。與脂質(zhì)雙層的附著是通過外圍區(qū)域的穿孔或通過與整合膜蛋白偶聯(lián)來實(shí)現(xiàn)的(參見圖3,B和C)。這些整合蛋白被嵌入,跨越整個(gè)脂質(zhì)雙層,并包含駐留在膜內(nèi)的疏水性α螺旋或β桶結(jié)構(gòu)。根據(jù)它們的細(xì)胞功能,它們可以進(jìn)一步細(xì)分為受體或通道等組。與親水性的胞外和胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域一起,大多數(shù)膜蛋白表現(xiàn)出兩親性特征。兩親性特征還產(chǎn)生一種特征,
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一、簡(jiǎn)介低聚木糖,又稱木寡糖,是由2~9個(gè)木糖單元,以β-1,4糖苷鍵連接而成的低聚糖混合物。S11137-25g低聚木糖BR,95%25g80.00現(xiàn)貨S11137-100g低聚木糖BR,95%100g180.00現(xiàn)貨S11137-500g低聚木糖BR,95%500g700.00現(xiàn)貨二、功效和應(yīng)用低聚木糖不僅能量低,而且具有許多有益功效:1.促進(jìn)有益菌雙歧桿菌增殖,同時(shí)產(chǎn)生多種有機(jī)酸,降低腸道pH值,抑制有害菌生長(zhǎng);2.低聚木糖的攝入,可減少有毒代謝產(chǎn)物形成,從而減少了肝臟分解毒素的負(fù)擔(dān);3.