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熒光定量服務(wù)
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訪問次數(shù)：2993更新時間：2024-06-12 11:58:42
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產(chǎn)品簡介
產(chǎn)品介紹
熒光定量服務(wù)
熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號也會相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強(qiáng)度的變化來對PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時的監(jiān)測，并以b-Actin或GAPDH等管架基因作為內(nèi)參照，對目的基因的表達(dá)量進(jìn)行半定量檢測。
科佰生物將根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實(shí)現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。
SYBR Green熒光染料法：適用于任何DNA，無需設(shè)計探針，采取雙標(biāo)準(zhǔn)曲線法，實(shí)驗(yàn)周期短，結(jié)果重復(fù)性好，靈敏度高。
TaqMan熒光探針法：經(jīng)驗(yàn)豐富的實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員設(shè)計探針，對目標(biāo)基因有高特異性，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性好，相對于SYBR Green法，靈敏度更高。
項(xiàng)目流程 | 內(nèi)容 | 價格 |
抽提樣品DNA或RNA | 細(xì)胞樣品 | 80元/樣 |
組織樣品 | 100元/樣 | |
引物/TaqMan探針設(shè)計與合成 | 優(yōu)化引物/探針設(shè)計與合成（探針法） | 150元/基因 |
優(yōu)化引物設(shè)計及合成（染料法） | 120元/基因 | |
RT反應(yīng) | RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA | 40元/樣品 |
預(yù)試驗(yàn)：熒光PCR體系優(yōu)化 | 確定熒光PCR反應(yīng)條件 | 500元/基因 |
標(biāo)準(zhǔn)曲線制作 | 相對定量（不需要） | 標(biāo)準(zhǔn)品為PCR產(chǎn)物：300元 |
定量（需要） | 標(biāo)準(zhǔn)品為質(zhì)粒：400元 | |
熒光PCR檢測 | 目的基因 | 50元/反應(yīng) |
內(nèi)參基因 | ||
以上技術(shù)服務(wù)報價為1個目的基因的報價。同一材料的N個目的基因的價格=1個目的基因價格×N × 0.75 | ||
1.定量：
定量首先必須構(gòu)建與檢測樣品目的基因具有相同序列的標(biāo)準(zhǔn)品。使用已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品制作3個點(diǎn)以上的標(biāo)準(zhǔn)曲線后，可以使用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知濃度的檢測樣品進(jìn)行量（起始拷貝數(shù)）分析。
2.相對定量（mRNA表達(dá)量分析）：
基因表達(dá)的研究一般采用相對定量的方法。相對定量法必須對樣品的目的基因和參比基因內(nèi)標(biāo)同時分別進(jìn)行定量，然后求出對于參比基因的目的基因的相對量。通過對樣品間的目的基因的相對量進(jìn)行比較，可以對不同樣品間的mRNA進(jìn)行表達(dá)量分析。參比基因通常選用表達(dá)量相對恒定的House Keeping Gene，如：GAPDH、b-actin等。通過同時對參比基因的實(shí)時檢測，可以對樣品之間由于起始細(xì)胞數(shù)不同、或RNA提取效率的不同等造成的RNA量誤差進(jìn)行校正，達(dá)到在嚴(yán)格意義上對樣品之間的mRNA表達(dá)量進(jìn)行分析之目的。
1、總 RNA 提取及定量；
2、PCR 引物設(shè)計及反轉(zhuǎn)錄；
3、熒光引物設(shè)計（SYBR Green 熒光染料法）/探針設(shè)計（TaqMan 熒光探針法)；
4、熒光定量PCR，進(jìn)行擴(kuò)增曲線、溶解曲線、表達(dá)量差異分析等實(shí)驗(yàn)；
5、數(shù)據(jù)分析與處理；
6、完整實(shí)驗(yàn)報告。
樣品要求：
1.樣品可提供組織、細(xì)胞、RNA、cDNA中的一種,對于提供樣本的大致原則如下：組織樣本,盡可能提供2×2×2mm3體積或以上,新鮮組織可直接提供，不需處理；對于細(xì)胞樣本，盡可能提供3×10^6個細(xì)胞左右,加適量Trizol處理即可，確保樣品適于RNA抽提。RNA、cDNA含量根據(jù)同等細(xì)胞數(shù)量的細(xì)胞抽提和逆轉(zhuǎn)錄大致界定, 如果提供RNA或cDNA我們要對您提供的材料進(jìn)行評估。
2.客戶提供盡可能詳細(xì)的背景信息；物種信息，擴(kuò)增目的基因的NCBI登錄號等。
3.運(yùn)輸要求，液氮或干冰保存寄送。
注：樣本應(yīng)避免各類污染和反復(fù)凍融。
提交的產(chǎn)品和資料：
1.RNA濃度及熒光定量PCR原始數(shù)據(jù)及分析結(jié)果；
2.熒光定量PCR完整的實(shí)驗(yàn)步驟、使用儀器、軟件設(shè)置參數(shù)等。
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