植物基因組DNA提取試劑盒
【簡單介紹】
品牌 | 其他品牌 | 規(guī)格 | 50 |
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 主要用途 | (適合從植物組織中提取基因組 DNA ) |
【詳細說明】
植物基因組 DNA 提取試劑盒
(Plant Genomic DNA Extraction Kit)
(適合從植物組織中提取基因組 DNA )
試劑盒組成 50 (50 次)
Plant Genomic DNA Extraction Ki 50
2 ml Collection Tube 50
Buffer KB (Column solution) 15 ml
Buffer KBL1 (Lysis solution) 2×30 ml
Buffer KW1(Wash solution ) 50 ml
Buffer KW (Wash solution ) 使用前加入 50 mL 無水 乙醇
Buffer KE (Elution solution) 15 ml
儲存條件
本試劑盒在室溫(15-25 ℃)下可保存一年。
產(chǎn)品特點:
TM Plant Genomic DNA Extraction Kit 采用*的疏水膜技術(shù),*去除植物組織細胞中蛋白和大部分 RNA 等各種干擾物,提取高純度的DNA。試劑盒采用*的緩沖系統(tǒng),可從絕大多數(shù)不同類型的植物包括水稻,小麥,玉米,擬南芥和大豆等植物中快速提取基因組 DNA。一般情況下,100 mg 新鮮組織的基因組 DNA 產(chǎn)量可達 5-30 μg。本試劑盒不適宜從棉花,煙草,油菜等富含多酚多糖類植物中提取總 DNA,多酚多糖類植物的提取可選用其他試劑盒 。
注意事項:
1.實驗前準備工作 :詳細閱讀該手冊熟悉各步驟,并準備好所有的試劑盒組分、研缽、研棒、藥匙、1.5 ml 和 2 ml 滅菌離心管以及 37 ℃和 65 ℃的溫浴條件。
2.2. KBL1 和 KW1 在低溫時可能產(chǎn)生混濁或沉淀,在 37-65 ℃溫浴片刻即可。
3. Buffer KW *次使用前請按瓶上標簽加入 50 ml 無水乙醇。每次使用后,請立即擰緊蓋子。
操作步驟:
( 一) 平衡吸附柱
1. 取一TM Mini Column 柱裝在一個 2 ml 收集管上(已備)。加入 300 μl Buffer KB 平衡液至柱子內(nèi),室溫 13 000 rpm 離心 1 min,使平衡液*流過柱子。棄收集管中的濾液,將空柱套回收集管內(nèi)。
注意:柱子不平衡,將導(dǎo)致 DNA 產(chǎn)率減少。
( 二 )樣品處理
2. 組織破碎:可根據(jù)不同樣品研磨難易程度選擇以下方法:
1)液氮研磨:將 50-100 mg 組織直接放入研缽,加入少量液氮,迅速研磨,再加少量液氮,再研磨,如此三次,將樣品研成粉末。用藥匙迅速將樣品干粉按 100 mg 組織/1000 μl KBL1 的比例加入一新的 2 ml 離心管中。加入 KBL1 后,震蕩混勻。室溫 13 000 rpm 離心 2 min。
2)直接研磨:對于新鮮植物組織,將 50-100 mg 組織直接放入研缽,按 100 mg 組織/1000 μl KBL1 比例加入 KBL1,直接在 KBL1 中將樣品研磨勻漿后,轉(zhuǎn)入 1.5 ml 離心管) (推薦)。室溫 13 000 rpm 離心 5 min。棄去沉淀,上清液待轉(zhuǎn)移。
注意:
1 )的 上述的推薦體積為使用的 KBL1 的小體積比例。 基因組DNA 的純度取決于 KBL1 的體積和標本的量,理論上 KBL1 的體積越大,
樣 本的量越少, DNA 質(zhì)量越好! 不同的植物組織有不同的比例,請在正式實驗前摸索。
2 )盡量使用新鮮樣品,或者樣品取得后立即直接保存于液氮或者
-70 ℃。
(三 )吸附
3.將上清液轉(zhuǎn)移到平衡過的吸附柱內(nèi),室溫 13 000 rpm 離心 30 s,使裂解液*流過柱子。棄去收集管中的過濾液,把柱套回收集管中。
4.注意:
1 )室溫太低可能造成 KBL1 混濁或沉淀,在 37 ℃ 溫浴片刻即可。
2 )如上清液 體積過大,可以分成數(shù)次上柱,每次 不要超過 700 μl。
4. )(可選)加入 30 μl 濃度為 20-50 μg/ml 的 RNase A 于柱的膜上,37 ℃放置 5-10 min。
注 意:本試劑盒沒有配備 RNase A 溶液。一般來說,這一步?jīng)]有必要,因?qū)?為本試劑盒的純化柱對 RNA 沒有吸附能力。如果實驗要求不能殘留微量RNA ,可采用這一步處理 。
( 四 ) 漂洗
5. 加入 700 μl Buffer KW1,室溫 13 000 rpm 離心 30 s,棄去收集管中的過濾液,保留柱。
6. 加入 700 μl Buffer KW,室溫 13 000 rpm 離心 30 s,棄去收集管中的過濾液,保留柱。 注意:Buffer KW 在*使用之前必須加入 50 ml 無水或95% 乙醇,并置于室溫下保存。
7. (可選)重復(fù)用 700 μl 70%乙醇(室溫)洗滌柱子,室溫 13 000 rpm離心 1 min。(注意:用 70%乙醇漂洗有利于提高 DNA 純度)
8. 棄去收集管中的濾液,將空柱套回收集管內(nèi)。室溫下,13 000 rpm 離心 2 min 以甩干柱子基質(zhì)殘余的液體。
注意: 此步驟不可省,否則 將導(dǎo)致乙醇殘留于 DNA 中 ,影響后續(xù)反應(yīng)。
( 五) ) 洗 脫
9. 把柱子裝在一個新的 1.5 ml 離心管上,加入 50 μl 的 KE(可用滅菌的 TE 10 mM Tris-HCl,pH 8.0 或純水代替,純水可預(yù)先用 NaOH 調(diào) pH 值至 8.0),65 ℃放置 5-10 min,13 000 rpm 離心 1 min 以洗脫 DNA。 (也可以將 KE 預(yù)熱至 65 ℃ ,再加至膜上,可以減少放置時間至 1min )注意:小心加 KE 到柱 中吸附膜的中間部位, 并 確保 液體 將膜全部覆蓋。
10 .DNA 應(yīng)保存于 4 ℃,若長時間保存,可凍存于-20 ℃。
本司部分DNA提取試劑盒,致電:020-8257 4011楊永漢
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