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超實用干貨（二）| 實驗室必看！液相色譜柱維護(hù)保養(yǎng)全攻略，輕松延長使用壽命
色譜柱是液相系統(tǒng)分離的“心臟”，是實現(xiàn)混合物分離的關(guān)鍵部件。心臟是一個堅韌而嬌嫩的器官，它的持續(xù)跳動確保身體各系統(tǒng)正常運轉(zhuǎn)，而它的任何病癥都會影響人體的狀態(tài)甚至生命。同樣地，色譜柱的狀態(tài)也直接決定了液相色譜分離效果和數(shù)據(jù)結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此，保持色譜柱的健康穩(wěn)定至關(guān)重要。
色譜柱的耐受性與使用壽命主要取決于三個關(guān)鍵因素，其中90%的色譜柱損壞是由后兩個因素引起的：
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先天身體素質(zhì)——色譜柱填料本質(zhì)上的化學(xué)穩(wěn)定性
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生活環(huán)境——樣品與流動相對色譜柱的污染
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作息養(yǎng)生習(xí)慣——色譜柱使用維護(hù)規(guī)范
那么，本文就圍繞液相色譜的樣品與流動相的前處理和色譜柱的日常維護(hù)保養(yǎng)規(guī)范展開，幫助大家延長色譜柱使用壽命和提高分析的準(zhǔn)確性、可靠性。
樣品和流動相中含有的固體顆粒物質(zhì)或者微生物都會堵塞色譜柱入口端的篩板。當(dāng)篩板被堵住后，會引起污染物富集，液流不均，不僅會引起柱壓的升高也會導(dǎo)致色譜峰型拖尾、變寬，從而使柱效下降。
溶解的樣品進(jìn)樣前建議用合適的針式過濾器過濾，以除去不溶物。
配置流動相的溶劑需使用色譜級別(HPLC級)的，水需要用娃哈哈或者屈臣氏的純凈水。流動相使用前用微孔薄膜過濾。同時還需要超聲波除去流動相中因溶解或因混合而產(chǎn)生的氣泡（氣泡會導(dǎo)致流量不準(zhǔn)，基線波動）。
即便是樣品和流動相經(jīng)微孔濾膜過濾后也仍然不能完全消除固體顆粒物質(zhì)，因為輸液泵的磨損、密封圈和管路的老化也會產(chǎn)生一些微小固體顆粒物質(zhì)，這些固體顆粒物質(zhì)被流動相帶入色譜柱，導(dǎo)致堵塞篩板。所以建議在色譜柱前端加裝保護(hù)柱，可以有效保護(hù)色譜柱前端的篩板不被堵塞和柱前端的填料不被污染。
色譜柱使用中最重要的一點就是一定要看使用說明書。因為色譜柱的使用說明書中包含了色譜柱日常維護(hù)保養(yǎng)的關(guān)鍵內(nèi)容。
因為色譜柱屬于易耗品，全新的液相色譜柱在使用前，建議按照色譜柱出廠報告中的條件進(jìn)行色譜柱的性能測試，并將結(jié)果保存起來，有利于日后監(jiān)測色譜柱的損耗情況。更能保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確和穩(wěn)定。
液相色譜柱通常都是有流向要求的，色譜柱出廠時都會標(biāo)明色譜柱的使用方向（Flow）。
避免任何的壓力突然變化；
柱溫不超過色譜柱的溫度使用范圍。
由于目前所用的色譜柱大多是以硅膠為基質(zhì)的，流動相的pH值過小時，會導(dǎo)致鍵合相的斷裂；當(dāng)pH值過大時，固定相顆粒硅膠易溶解。所以色譜柱的pH使用范圍非常關(guān)鍵，一旦發(fā)生超出pH使用范圍的情況發(fā)生，色譜柱入口處就會塌陷，導(dǎo)致色譜峰異常。
色譜柱的保存建議使用色譜柱說明書的儲存溶液進(jìn)行保存，柱子不能保存在純水或含鹽水溶液中，否則會引起微生物的滋生。
反相色譜柱使用及貯存：
新色譜柱的活化：首次使用時，用純有機相沖洗30倍柱體積，將泵流速設(shè)置為0.1mL/min（或最低設(shè)置）并在30分鐘內(nèi)增大至正常流速。
過渡流動相：有機相和水相的組成與分析流動相比例相同，但是不含緩沖鹽的溶液，過渡20倍柱體積。
樣品分析：流動相平衡20倍柱體積，基線平穩(wěn)后，開始進(jìn)樣。
分析完成后沖洗：再用過渡流動相以1.0mL/min 沖洗色譜柱30倍柱體積，然后保存溶劑沖洗30倍柱體積保存。
短期保存 ：不超過四天，按日常維護(hù)沖洗至系統(tǒng)基線平穩(wěn)，保存在純有機溶劑中，然后確認(rèn)色譜柱堵頭已塞緊。
長期保存 ：超過四天，請將色譜柱貯存在出廠保存溶劑中，并確認(rèn)色譜柱堵頭已塞緊。
超過兩個月不使用 ：請每兩個月用出廠保存溶劑沖洗一次，避免干涸。
注意事項：
*切勿使用緩沖液或離子對試劑貯存色譜柱；
*避免純水沖洗色譜柱，用純水短時間內(nèi)沖洗色譜柱，通常不會對色譜柱立刻造成較大的損傷，但如果長時間用水沖洗色譜柱則可能引起固定相流失、固定相塌陷現(xiàn)象和柱效下降。
正相色譜柱使用及貯存：
色譜柱的再生是指通過一些手段將色譜柱的部分性能恢復(fù)。色譜柱是易耗品，通常都是有使用壽命的。隨著時間和進(jìn)樣次數(shù)的增加，一些保留性較強的物質(zhì)會積累在柱頭，流動相溶液成分不足以把這些物質(zhì)洗脫，以致于會出現(xiàn)色譜峰降低，峰寬變大或者“鬼峰”，柱效下降的情況。為了有效地延長色譜柱的使用壽命，建議進(jìn)行必要的再生清洗。下面是實驗室常用的色譜柱再生方法，供大家參考。
反相固定相的再生
使用下列每種溶劑20-30倍柱體積，流速為典型流速的1/5到1/2進(jìn)行沖洗：100%甲醇—100%乙腈—100%異丙醇—100%二氯甲烷或100%正己烷—100%異丙醇—100%甲醇。
正相固定相的再生
使用下列每種溶劑20-30倍柱體積，流速為典型流速的1/5到1/2進(jìn)行沖洗：100%正己烷→100%氯仿→100%乙酸乙酯→100%丙酮→100%乙醇→100%異丙醇。