EPO紅細(xì)胞生成素檢測(cè)試劑盒

【產(chǎn)品規(guī)格】

96T

【預(yù)期用途】

該試劑盒可用于人血清中紅細(xì)胞生成素的體外定量檢測(cè)?？奢o助診斷貧血和紅細(xì)胞增多癥。隨著重組EPO的出現(xiàn)，它可作為生物治療增加紅細(xì)胞數(shù)量，那么EPO試驗(yàn)就可用于輔助貧血癥病人的預(yù)測(cè)和用藥過(guò)程的觀(guān)察

【前言簡(jiǎn)介】

EPO是分子量為30000-340000道爾頓的糖蛋白，人EPO是由165個(gè)氨基酸組成的多肽，包含有一個(gè)O-連接和3個(gè)N-連接的糖鏈。重組EPO在免疫試驗(yàn)中是天然蛋白的良好替代品。血清中的EPO水平由蛋白的生成率和清除率決定，90%的EPO由成人腎臟的腎小管細(xì)胞產(chǎn)生，組織氧化中會(huì)降低?，F(xiàn)象表明，這些細(xì)胞中用于檢測(cè)血氧飽和度的蛋白是一種血紅素基團(tuán)，隨著血漿中的氧分壓的降低，EPO濃度會(huì)增加，這也提示我們?cè)谡５募?xì)胞內(nèi)，血清中EPO濃度與紅細(xì)胞量呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。

血清中EPO濃度的定量檢測(cè)可輔助貧血或紅細(xì)胞增多癥的診斷。再生障礙性貧血，溶血性貧血和貧血都是由于缺鐵導(dǎo)致海拔血清EPO。而繼發(fā)性貧血患者體內(nèi)的EPO水平是由于腎功能衰竭和其他疾病如獲得性免疫缺陷綜合征（AIDS）引起，這就是zui有可能由于腎臟受損而引起的EPO大量產(chǎn)生的原因。低濃度的EPO可對(duì)腎移植排斥反應(yīng)做出早期預(yù)警，還可以用于監(jiān)測(cè)艾滋病人使用AZT的治療過(guò)程，EPO濃度的增加表明貧血與AZT治療相關(guān)聯(lián)是由于紅細(xì)胞發(fā)育不全或apliasia

紅血球增多癥，或原發(fā)性紅細(xì)胞增多癥（紅細(xì)胞量增加）起因于紅細(xì)胞未受到刺激，因此，血紅蛋白的增加引起EPO的減少，導(dǎo)致血清中EPO水平降低。繼發(fā)性紅血球增多癥，也是總紅細(xì)胞數(shù)增加，循環(huán)EPO水平提高的生理反應(yīng)，引起了組織缺氧，缺氧因素可能有肺纖維化，心血管疾病，長(zhǎng)期暴露在高海拔地區(qū)，異常形式的血紅蛋白和藥物治療。一些腫瘤也會(huì)產(chǎn)生EPO，這種情況下，EPO可作為監(jiān)測(cè)有效治療的腫瘤標(biāo)記物。

【檢測(cè)原理】

此試劑盒采用的是雙位點(diǎn)酶聯(lián)法，檢測(cè)具有生物活性的EPO氨基酸鏈，采用兩種不同的鼠單抗與人EPO特異性結(jié)合。一個(gè)是生物素標(biāo)記的鼠單抗，另外一個(gè)是HRP標(biāo)記鼠單抗。

試驗(yàn)中，標(biāo)準(zhǔn)品，質(zhì)控品或是樣品與酶標(biāo)抗體和生物素標(biāo)記抗體一起在鏈霉親和素包被的微孔板內(nèi)孵育，孵育結(jié)束后，洗去未結(jié)合的成分，再加入TMB底物液孵育，終止液加入終止反應(yīng)，顏色變?yōu)辄S色。黃色強(qiáng)度與樣品中的EPO成正比，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度和OD值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，質(zhì)控和樣本中的EPO濃度可直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上讀取。標(biāo)準(zhǔn)品已經(jīng)WHO EPO標(biāo)準(zhǔn)認(rèn)證，WHO參考標(biāo)準(zhǔn)品是EPO*標(biāo)準(zhǔn)（87/684）

【試劑盒成分】

1. 試劑1（RTG1），生物素標(biāo)記的EPO抗體（抗人EPO鼠單抗），1x3.5ml,Proclin 300作為防腐劑

2. 試劑2（RTG2）,1x3.5ml，HRP標(biāo)記抗體(抗人EPO鼠單抗)

3. 試劑A（RTG A），1x30ml，洗滌濃縮液

4. 試劑B（RTG B）, 1x20ml，TMB底物液

5. 終止液（SOLN），1x20ml，1N硫酸

6. 微孔板（PLA），12x8孔

7. 標(biāo)準(zhǔn)品（CAL），標(biāo)準(zhǔn)品A：0mIU/ml，1x4ml；標(biāo)準(zhǔn)品B-F，1x2ml，具體濃度見(jiàn)標(biāo)簽。凍干，合成h-EPO，零標(biāo)準(zhǔn)品是蛋白緩沖液，其他的標(biāo)準(zhǔn)品則是含有合成物h-EPO（1-165）的蛋白緩沖液

8. 質(zhì)控品（CTRL），質(zhì)控1&2，凍干，2ml/支，含含有合成物h-EPO（1-165）的蛋白緩沖液，含有環(huán)丙沙星防腐劑

實(shí)驗(yàn)所需材料但試劑盒未提供

1. 450nm和405nm的酶標(biāo)儀

2. 洗板機(jī)

3. 移液器，25；200；100；150ul

4. 多通道移液器，25；100；150ul

5. 計(jì)時(shí)器

6. 去離子水或蒸餾水

7. 振蕩器

【注意事項(xiàng)】

1. 實(shí)驗(yàn)前認(rèn)真閱讀實(shí)驗(yàn)說(shuō)明書(shū)，嚴(yán)格按照要求操作才能得到好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2. 高低質(zhì)控在每次實(shí)驗(yàn)都應(yīng)檢測(cè)，可便于評(píng)估實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性

3. 試劑的配制或稀釋?xiě)?yīng)用去離子水或雙蒸水

4. 處理試劑盒樣本時(shí)應(yīng)戴手套，減少傷害

5. 實(shí)驗(yàn)前將所有試劑和樣本平衡至室溫，混勻，避免反復(fù)凍融

6. 每次試驗(yàn)都應(yīng)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

7. 每次試驗(yàn)都應(yīng)做質(zhì)控，并確保結(jié)果在質(zhì)控范圍內(nèi)

8. 操作不當(dāng)，加樣量不準(zhǔn)，洗板不*，試劑貯存不當(dāng)都會(huì)影響到質(zhì)控結(jié)果不在可接受范圍

9. 酶標(biāo)儀讀數(shù)時(shí)，若存在有氣泡則會(huì)影響OD值，讀數(shù)前小心移除所有氣泡

10. 底物液光敏感物質(zhì)，應(yīng)避光保存，穩(wěn)定性降低或污染會(huì)導(dǎo)致試劑顏色變藍(lán)，而不能再用

11. 加底物液和終止液時(shí)，避免接觸到金屬材料

12. 避免試劑交叉污染，每次加樣時(shí)都采用新的槍頭

13. 不要將不同批次的試劑混合，不要使用過(guò)期的試劑

14. 所有試劑廢物的處理應(yīng)嚴(yán)格按照國(guó)家規(guī)定實(shí)施

【參考文獻(xiàn)】

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